在微生物发酵中，也存在混菌发酵，但也是已知混菌，只要是研究就只允许生产菌种存在，不能因为混杂其他菌种而影响试验结果或无法分析试验结果。因此，对所需物品和材料灭菌，环境消杀非常重要。

下面一起学习一下既方便又实用的实验室灭菌消毒方法。

二、微生物实验室常用的灭菌方法

（一）干热灭菌法

定义：顾名思义，在干燥高温环境（如火焰或干热空气）条件进行灭菌的技术，不需要加水等操作。

原理：干热灭菌是在高温条件下将微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

分类：主要包括火焰灭菌法和干热空气灭菌法。

1.火焰灭菌法

灭菌方法：又叫灼烧法，直接用酒精灯火焰等灼烧器械或器皿的方法。

适用范围：实验室接种针、镊子等金属器械灭菌，三角瓶、培养皿和试管等瓶口的灭菌。

注意事项：使用过程中，注意冷却时间，以免影响目标菌种。

2. 干热空气灭菌法

灭菌条件：干热空气灭菌所需温度更高（160-170℃），时间更长（1-2h），一般160℃、灭菌2h，但干热灭菌温度不能超过180℃，否则包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。

适用范围：耐高温的玻璃和金属制品，不允许湿热气体穿透的油脂和耐高温的粉末化学药品。

优点：无毒、不伤害环境、对金属和锋利的仪器无腐蚀性。

缺点：热穿透速度慢、杀菌杀灭耗时、不适用于大多数材料。

注意事项：

使用过程中，物品不能摆放太挤，需要留出一定的空间，以免影响空气流通；

物品不能靠壁，以免烧焦或起火。

（二）湿热灭菌法

定义：跟干热灭菌相对，它是一种利用高温和湿润条件灭菌的方法，主要使用高压蒸汽、沸水或流通蒸汽进行灭菌。主要指高压蒸汽灭菌法，高压蒸汽灭菌是最常用灭菌最彻底的灭菌方法。

灭菌条件：实验室常用的灭菌方法。将待灭菌物品放入高压蒸汽灭菌锅中，通过加压高温蒸汽进行灭菌，通常在121℃下保持20-30分钟。根据不同的物品，选择不同的灭菌温度和灭菌时间。

优点：蒸汽来源容易，操作费用低廉，无毒，灭菌彻底，不会留下任何化学残留物，对环境无污染。

缺点：设备费用高，不能用于怕受潮的物料灭菌。

注意事项：

原理：将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。

滤膜孔径应在0.22～0.45μm范围内或用更小的细菌滤膜，溶液通过滤膜后，细菌和孢子等因大于滤膜孔径而被阻，并利用滤膜的吸附作用，阻止小于滤膜孔径的细菌透过。

适用范围：多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。

2. 巴氏消毒法

适用范围：乳制品多采用巴氏消毒法，将需要灭菌的液体加热至68℃左右，保持15-30min，以杀死其中的病原菌。

优点：减少营养成分流失，保留食品风味。

缺点：不能杀死所有细菌，灭菌不彻底。

3. 甲醛熏蒸法

原理：甲醛是一种无色易溶于水的有机化合物，具有刺激性气味。它是一种传统的灭菌剂，通过与微生物的蛋白质、核酸等生物分子发生反应，破坏其结构和功能，从而杀死微生物。

适用范围：实验室环境消杀。

优点：不受环境温度、湿度和微生物种类等影响，因此被广泛应用于各种场所的消毒。

缺点：甲醛对眼睛、皮肤和呼吸系统等具有刺激作用。

注意事项：

甲醛蒸汽在遇到明火或高温时会发生爆炸，需要避免火源。

利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。

灭菌方法：使用前打开紫外灯照射，时间为30min。使用时关闭紫外灯，通风5-10min，再进行操作。

原理：通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。

适应范围：适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。

优点：

紫外线消毒不会产生任何化学物质，因此不会带来环境污染；

紫外线消毒速度相对快；

紫外线消毒的效果非常好，可以杀灭包括细菌、病毒、真菌等多种病原体；

紫外线消毒设备相对简单，安装和维护成本较低。

缺点：

紫外线对光线的穿透力较弱，因此只能对表面的病原体进行消毒，对于深层的病原体效果较差；

紫外线消毒存在死角，容易有消毒盲区；

紫外线消毒的效果受到多种因素的影响，例如温度、湿度、水质等，需要严格控制消毒环境。

注意事项：

操作过程中，要关闭紫外灯；

紫外线灯管寿命较短，紫外线消毒设备需要定期维护，以确保消毒效果。

5.臭氧法

原理：臭氧是一种强氧化剂，能够氧化分解细菌内部酶类，破坏他们的细胞器和DNA、RNA，作用于外膜的脂蛋白的内部的脂多糖，使细菌发生通透性畸变而溶解死亡。