一、培养基概述
1.定义
培养基是指由人工配制而成的，适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的，微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养基质。微生物的营养要素，即碳源、氮源、能源、生长因子，无机盐和水。一方面，如何合理地利用这些营养要素，设计出合理的培养基配方是个问题；另一方面，设计出的培养基是否符合微生物的生长需求、代谢物的环境要求、经济等方方面面也是问题，都值得我们深入研究。
固体培养基：用于分离、纯化、鉴别、技数和保存微生物菌种等。
半固体培养基：用于厌氧菌培养菌分离和培养、观察微生物运动、保藏微生物菌种等。
常见的基础培养基：比如，LB培养基、YPD培养基、PDA培养基、MRS培养基……常见的选择培养基：比如，以纤维素为唯一碳源的培养基可用于筛选纤维素降解菌、无氮培养基只能供有固氮能力的固氮菌生长……常见的鉴别培养基：比如，EMB培养基（伊红-亚甲蓝培养基）
4.培养基的选择原则
目的要明确：明确培养哪类微生物，产物是什么，用途等等
营养协调：参考微生物细胞组成元素。
理化适宜：培养基的pH、渗透压等物理化学条件较为适宜。
二、微生物培养基的制备
（一）不同微生物的培养条件和最适培养基配方
比如，枯草芽孢杆菌，最适培养条件：37℃、pH7，最适培养基配方：营养琼脂培养基；
大肠杆菌，最适培养条件：37℃、pH7，最适培养基配方：LB培养基；
酵母菌，最适培养条件：30℃、pH5，最适培养基配方：YPD培养基；
乳酸菌，最适培养条件：37℃、pH6，最适培养基配方：MRS培养基；
霉菌，最适培养条件：28℃、pH5.5，最适培养基配方：PDA培养基；
链霉菌，最适培养条件：28℃、pH5.5，最适培养基配方：高氏1号培养基……
培养基的配制跟做菜一样，一样都不能落下，需要找原料配料、原料溶解后需要调节溶液pH值、分装、包装、灭菌等步骤。
(1) 计算：根据培养基配方，计算实际用量，记录实际称量质量。用类似表格进行记录。
(2) 称量：将所有物品放在天平左侧，依次称量各试剂，倒入烧杯中。称完每种试剂，放到天平右侧，标记√或×或—。要选择合适的天平进行称量，量少选用电子天平，量多选用分析天平，如果是大量的试剂，则选用台秤。
(3) 溶解：先加入2/3水溶解，待全部溶解后，定容。
(4) 调节pH值：除特殊说明，一般用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节溶液pH。可以用pH试纸也可以用pH计，pH试纸比较粗略，pH计精确但需要经常校准。
(5)分装：根据试验要求，将液体培养基分装至三角瓶或其他容器内。
(6)封口：用透气膜或棉塞封口。标记培养基名称、日期等。
透气膜使用方便，一般不重复使用；棉花塞透气性好，麻烦不美观，可以重复使用，根据需要使用。
(7)灭菌：将上述配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中灭菌，设定合适的温度和时间。(8)冷却：待灭菌完成后，取出，冷却，冷却后使用。固体培养基和液体培养基的区别在于：一个是固体，一个是液体；一个加了凝固剂琼脂粉，另一个没加凝固剂；固体培养基用于分离、培养、鉴别菌种，液体培养基用于扩大培养。(2)准备培养皿：将试管和培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸或报纸包好，注明皿盖的方向，高压蒸汽灭菌或干燥灭菌后烘干备用，也可直接使用一次性无菌培养皿。玻璃培养皿可以重复利用，处理麻烦；一次性培养皿省事，成本高。(3)称量：除琼脂粉外，其余试剂称量同液体培养基配制。先不称量琼脂粉。(7)加热溶解：在常温下琼脂粉不溶，需要加热溶解，不需要分装的也可以直接灭菌。灭菌之后要摇匀，否则琼脂粉沉在底部，容易不凝固或太硬。(8)分装：固体培养基分装需要在琼脂粉溶解后进行分装。试管1/4高度，三角瓶不超过1/2容积，对于好养菌的培养，三角瓶容积的1/10，也可根据目标菌的培养条件，适当调整。(9)封口：试管用试管塞封口，然后包上牛皮纸，用皮筋或棉线捆绑；三角瓶用透气膜或纱布封口，用皮筋或棉线捆绑。标记培养基名称、日期等信息。硅胶塞透气性差，使用方便，棉花塞透气性好，麻烦不美观，根据需要使用。
(10)灭菌：将上述配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中灭菌，设定合适的温度和时间。还有部分不能灭菌的试剂，需要采用过滤除菌。
比如，胰蛋白胨和酵母浸粉适合121℃，灭菌20min；葡萄糖适合115℃，灭菌20min，氨苄需要过滤除菌。
(11)冷却：待灭菌锅温度降至80℃以下，取出培养基，轻轻摇匀，准备倒平板，或摆斜面。待温度降至50℃左右，取出尚未凝固的培养基置于超净工作台内，略打开无菌培养皿盖露一小缝 )，倒入培养基，封盖、冷凝，凝固后倒置备用。
斜面长度不超过试管的1/2-2/3，斜面过长容易染菌，不能使用，应舍弃。
(12)整理：将试剂和其他物品放回原处，擦拭台面。(1)要选择合适的天平进行称量，量少选用电子天平，量多选用分析天平，如果是大量的试剂，则选用台秤。(3)易与称量纸粘连一起的试剂，可以将试剂与称量纸一起放入水中，试剂与称量纸分离后，取出称量纸。(4)详细记录培养基的名称、配方、来源、各成分的厂家批次，最好保留样品以备后续检验。(5)灭菌条件不一致的试剂，要单独称量，单独灭菌。
(6)调节溶液pH，不能过酸过碱来回调节，尽量不要调过，以免影响溶液中离子浓度。
(8)试管封口有棉塞、硅胶塞、橡胶塞和试管塞，可以根据用途，进行选择。(9)倒平板之前，要靠壁摇匀，不能有气泡，否则既不美观，也不实用。(10)摆斜面时，斜面不能太长，容易污染，斜面太短可以使用，但有点浪费空间。
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