一、糖发酵管

成分：

牛肉膏 5g

蛋白胨 10g

氯化钠 3g

磷酸氢二钠  2g

0.2％滇麝香草酚蓝溶液 12mL

蒸馏水 1000mL

PH 7.4

制法

1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。

2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶1000 mL，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。

注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。

试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14~30d。

 

二、乳糖胆盐发酵管

成分：

蛋白胨 20g

猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g

乳糖 10g

0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL

蒸馏水 1000mL

制法：将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。

注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。

 

三、5％乳糖发酵管

成分：

蛋白胨 0.2g

氯化钠 0.5g

乳糖 5g

2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL

蒸馏水 100mL

pH 7.4

制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121 ℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。

注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。

 

四、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）

成分：

磷酸氢二钾 5g

多胨 7g

葡萄糖 5g

蒸馏水 1000mL

制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1mL ，121℃高压灭菌15min。

甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性，甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95％乙醇中，然后加入20 mL蒸馏水。

V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6％α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40％氢氧化钾溶液0.2mL充分振摇试管，观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。

 

五、营养明胶

成分：

蛋白胨 5g

牛肉膏 3g

明胶 120g

蒸馏水 1000mL

pH 6.8~7.0

制法：加热溶解，校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固，复查最终pH应为6.8～7.0。

试验方法：用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。

 

六、苯丙氨酸培养基

成分：

酵母浸膏 3g

DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g）2g

磷酸氢二钠 1g

氯化钠 5g

琼脂 12g

蒸馏水 1000mL

制法：加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。

试验方法：自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36士1℃培养4h或18～24h，滴加10％三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

 

七、蛋白胨水（靛基质试验用）

成分：

蛋白胨（或胰蛋白胨）20g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000mL

pH7.4

制法：按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。

靛基质试剂

柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25ml。

欧-波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内，然后缓慢加入浓盐酸20 ml。试验方法：挑取小量培养物接种，在36士1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5 mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。

注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。

 

八、硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）

成分：

牛肉膏 3g

酵母浸膏 3g

蛋白胨 10g

硫酸亚铁 0.2g

硫代硫酸钠 0.3g

氯化钠 5g

琼脂 12g

蒸馏水 1000 mL

制法：加热溶解，校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。

试验方法：挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36士1℃培养1～2d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。

注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。

 

九、尿素琼脂

成分：

蛋白胨 1g

氯化钠5g葡萄糖1g

磷酸二氢钾 2g

4%酚红溶液 3 mL

琼脂 20g

蒸馏水 1000 mL

20%尿素溶液 100mL

制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min。冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2％，最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36士1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

 

十、氰化钾（KCN）培养基

成分：

蛋白胨10g

氯化钠 5g

磷酸二氢钾 0.225g

磷酸氢二钠 5.64g

蒸馏水 1000 mL

0.5%氰化钾溶液 20 mL

pH 7.6

制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL培养基加入0.5％氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1：10000），分装于12mm*100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。

 

十一、营养琼脂

成分：

蛋白胨10g

牛肉膏3g

氯化钠5g

琼脂15～20g

蒸馏水1000mL

制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2~7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。

 

十二、营养肉汤

成分：

蛋白胨 10g

牛肉膏 3g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000mL

pH7.4

制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225 mL ，121℃高压灭菌15min。

 

十三、缓冲蛋白胨水（BP）

成分：

蛋白胨 10g

氯化钠 5g

磷酸氢二钠 9g

磷酸二氢钾 1.5g

蒸馏水1000mL

pH 7.2

制法：按上述成分配好后以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。

注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。

十四、EC肉汤

成分：

胰蛋白胨 20g

3号胆盐（或混合胆盐）1.5g

乳糖 5g

磷酸氢二钾 4g

磷酸二氢钾 1.5g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000mL

制法：将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min。最终pH为6.9±0.2。

 

十五、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）

基础培养基

多胨或眎胨 5g

胆盐 1g

碳酸钙 10g

硫代硫酸钠 3g

蒸馏水 1000mL

碘溶液

碘 6g

碘化钾 5g

蒸馏水 20 mL

制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100mL。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀，121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL，,0.1%煌绿溶液1mL。

 

十六、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）

成分：

蛋白胨 5g

乳糖 4g

亚硒酸氢钠 4g

磷酸氢二钠 5.5g

磷酸二氢钾 4.5g

L-胱氨酸 0.01g

蒸馏水 1000mL

1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法：称取L-胱氨酸0.1g或（DL-胱氨酸0.2g），加1mol/L氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。

制法：将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。

分装于灭菌瓶中．每瓶100mL，pH应为7.0±0.1。

 

十七、亚硫酸铋琼脂（BS）

成分：

蛋白胨 10g

牛肉膏 5g

葡萄糖 5g

硫酸亚铁 0.3g

磷酸氢二钠 4g

煌绿 0.025g

柠檬酸铋铵 2g

亚硫酸钠 6g

琼脂 18~20g

蒸馏水 1000mL

pH 7.5

制法：

1.将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。

2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。

3将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃。

4将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5mL，摇匀，冷至50～55℃，倾注平皿。

注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处，超过48h不宜使用。

 

十八、三糖铁琼脂（TSI）

成分：

蛋白胨 20g

牛肉膏 5g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化钠 5g

硫酸亚铁铵 0.2g

硫代硫酸钠 0.2g

琼脂 12g

酚红 0.025g

蒸馏水 1000 mL

pH 7.4 

制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 mL，摇匀，分装试管。装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。

 

十九、三糖铁琼脂换用方法

成分：

蛋白胨15g

眎胨5g

牛肉膏 3g

酵母膏 3g

乳糖 10g

蔗糖 10g

葡萄糖 1g

氯化钠 5g

硫酸亚铁 0.2g

硫代硫酸钠 0.3g

琼脂 12g

酚红 0.025g

蒸馏水 1000 mL

pH7.4

制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 mL，摇匀，分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。

 

二十、嗜盐性试验培养基

成分：

蛋白胨2g

氯化钠 按不同量加

蒸馏水100 mL

pH7.7

制法：配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠：（1）不加；（2）3g；（3）7g；（4）9g；（5）11g。待溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min。