GB/T 4789.3-2003 大肠菌群测定

03版只有一个方法：MPN法，也有人叫九管法。

阳性的方法步骤：

制样→接种到乳糖胆盐发酵管→伊红美蓝培养基→乳糖发酵管（同时做革兰氏染色）→看表计算。

其实这个方法比较简单的一个方法，也是常说的半定量的方法。

我们下面说一下这个方法的注意事项。

第一，这个方法是一个半定量的方法，最不好要用于测量审核上。

第二，做实验前要注意导管里是否有空气（最好使用大直径的小导管），以免影响结果的判断，增加工作量。

第三，经常有人会无视标准有一个粪大肠的检测步骤。这个很少人会去做。

第四，对伊红美蓝的阳性现象不了解（其实实验室可以在做出阳性结果之后，将菌接出来，以后用来做人员培训）。

第五，对标准是否还在实行不清楚，很多人在16版出来的时候，都在问03版是不是也作废了，其实并没有。03版目前还在执行着（毕竟还有些标准还在用着它的单位）。

GB 4789.3-2016  大肠菌群计数

这个标准里有两个方法：MPN法和平板计算。

首先说MPN法，它相对于03版的MPN有一定的区别。第一这两个方法用的培养基完全不一样。第二16版的方法没有伊红美蓝画线，这样的过程减少了一步相对简单一点。第三单位变了。

平板法：其实平板是我们目前用得最多的一个方法，步骤看标准的实验流程图。

那么平板法有什么注意的呢？

第一，做平板法的时候需要覆盖第二层培养基，它的作用是：有助于典型菌落形成也为了防止蔓延性细菌生长。

第二，挑菌，其实这一步主要怕挑菌的时候挑不到菌，其实你可以把带菌的部分培养基完全挑起来（不要怕培养基包含着它出不来）放到BGLB内，然后用手腕力摇一下试管就可以把培养基打碎。

第三，计算问题，标准挑取10个典型菌落。然后计算比例再乘以所有典型菌落的数（有人会在这里纠结，觉得不太准确，应该所有菌落都挑取）其实这个一个想法很好，但是这样之后增加工作量的同时影响效率。其实在平板上你应该区分典型菌落出来去做就可以（当然这步要考验一个人的眼力和经验）初学者可以根据形态进行分类，然后以形态特征进行验证。

两个版本的一些检测方法和注意事项都说了，那么我们说一下一些朋友常问的一些问题。

1. 03版的结果能不能和10版的结果进行换算和比较。

答：其实换算是不行的，这个两个不同的标准。如果只是进行比较两个结果是可以的，但是不建议。

2.如何选择检测方法？

答：你要根据产品的执行标准去选择检测方法，不是说你喜欢那种就可以用那种。

3、同一批产品，检测的两份结果不一样，是不是那里出问题？

答：其实不是出问题，这个是正常的，同一批产品不代表他们的微生物检测结果是一模一样的，如果是这样也没必要做五份去验证产品合格了吧？如果说同一份样品（制成一份样）出现结果差好远的话，这里就要去分析那里出问题。

好像就这些问题比较常见。