本文我们将和大家简单聊一下灭菌前后pH值变化的那些事。
在高压湿热灭菌时,长时间的高温会对培养基产生很多不利的影响,例如会导致营养物质分解、营养成分改变以及pH值变化,进而影响微生物生长。同时还可能引起培养基颜色变化、透明度降低、琼脂凝胶强度变化等。培养基在灭菌过程中,灭菌的温度和时间,高压灭菌器升温、降温的速率,灭菌容器的容积和装载方式等因素都对培养基的灭菌有着重要影响。
在培养基的配制过程中我们会发现,同样的灭菌温度和时间,同样的体积和装量的不同培养基,在灭菌后pH值变化不同,有的培养基pH值变化较多,有的培养基pH值变化较少。这是因为不同培养基的成分不尽相同,而不同的成分在灭菌过程中对培养基pH值有着不同的影响。糖类和蛋白胨是培养基中最常见的两种重要成分,那么这两种成分分别对培养基灭菌后pH值有着什么样的影响呢?
糖类,例如葡萄糖、乳糖等作为碳源被微生物所利用。糖类在高温条件下会产生有机酸使培养基pH值下降。一般情况下,培养基含糖量越高,灭菌后pH值下降越多。如果过度灭菌pH值变化会更加明显。同时,糖类在高温灭菌时容易焦化,使培养基颜色加深。
蛋白胨一般作为培养基氮源,为微生物的生长提供营养物质。蛋白胨在培养基灭菌时还能对培养基的pH值变化起到一定的缓冲作用。一般含胨量高的培养基,灭菌前后pH值变化相对较小。
另外,若培养基成分中含有缓冲剂,如磷酸氢二钾等,也可以减少培养基灭菌前后pH值的变化。
同一培养基在不同温度下测得的pH值也会有一定差异,一般培养基的pH值会随着测量时温度的升高而降低。培养基灭菌之后未完全冷却时,测量的pH值一般会偏低,这是由于温度升高时溶液中的游离离子数增多,测得的pH值较低;反之,当温度降低时游离离子数减少,测得的pH值较高。通常我们在测定培养基pH值时,温度控制在25℃左右。