紫外可见分光光度分析的定量依据是光吸收定律,但具体操作方法却有多种
4.2.1 标准曲线法
即工作曲线法,适用于大量重复的样品分析,是工厂控制分析中应用最多的方法。
根据光吸收定律,对于一种有色化合物,ε是一个定值,若把光程L也固定,那么吸光度A就和溶液的浓度c成正比,也就是说吸光度A和浓度c呈线性关系。
配制一系列适当浓度的标准溶液,显色后分别测定其吸光度,把吸光度A对浓度c作图,即得工作曲线。
4.2.2 直接比较法
直接比较法其实质也是工作曲线法,是一种简化的工作曲线法。
配一个已知被测组分浓度为cs的标样,测其吸光度为As,在同样条件下再测未知样品的吸光度为Ax,通过计算可求出未知样品的浓度cx。
As=εcsL
Ax=εcxL
由于溶液性质相同,比色皿厚度一样,所以As/Ax=cs/cx
式中:
cs-已知被测组分的浓度,mol/L;
cx-未知样品的浓度,mol/L;
As-已知被测组分的吸光度;
Ax-未知样品的吸光度。
直接比较法简化了绘制工作曲线的步骤,适用于个别样品的测定。
操作时应注意配制标样的浓度要接近被测样品的浓度,这样能减少测量误差。
4.2.3 标准加入法
标准加入法是工作曲线的一种特殊应用。
选择适当的显色条件,先测定浓度为cx的未知样品吸光度为Ax,再向未知样品中加入一定量的标样,配置成浓度为cx+Δc1、cx+Δc2……一系列样品,分别显色后再测定吸光度为A1、A2……最后在坐标纸上绘图,以吸光度A为纵坐标,以浓度c为横坐标,分别画出Δc1、Δc2所对应的A1、A2等各点,连成直线后延长,与横轴的交点cx也就是未知样品的浓度cs。
应用标准加入法时要注意,加入的标样浓度要适当,使画出的曲线保持适当角度,浓度过大或过小都会带来测量误差。
这种方法操作比较麻烦,不适于作系列样品分析,但它适用于组成比较复杂,干扰因素较多而又不太清楚的样品,因为它能消除背景的影响。