1.老师，就是对于生物素和叶酸曲线和理化的标准曲线是有区别的，不用追求R值吗？

 

标准曲线代表是微生物的生长趋势，不同于理化检验的化学标准品的含量曲线，R值是趋势线拟合程度的指标，手绘标准曲线或者Excel这两种方式获得的结果差异不大，均不必要体现R值，可以省略。

 

2.老师，是直接吸取一定体积的中间液加入固体奶粉样品中进行加标回收吗？

是的，直接混合再加提取液，算在第一步的整体的稀释液体积里。

3.老师，你们的不锈钢试管帽是定制的吗？用的是螺旋口的试管吗？

是实验室自己定制的，不锈钢材质。

菌种的传代和菌悬液的制备都是用的螺口试管，易于保存和离心。

4.可以分享下叶酸的培养基吗？BD好像买不到了？有用国产培养基好的推荐吗?

本试验现在用是博源诺信的叶酸培养基，货号（F82210），对应菌株是ATCC7469，效果可以。

5.老师，我们现在买不到大于99%的叶酸标准品，这个怎么办？

进行换算，比如买的标准品是95％的叶酸培养基，那么就用20mg除以95%，再除以1000，得到标准品的称取的量为0.0211g（21.1mg）。

6.老师，标准曲线的制作是否可以选择其中的部分点进行，不满足8管，只有5、6管时是否可以做标准曲线？

标准曲线的制作要按照标准的要求，满足8个点，每个点保证3管平行，保证每个点都有数值进行标准曲线的绘制。

7.老师，VB12紫外测定为何有两个波长？

GB5413.14-2010标准中描述的波长为550nm，待发布的新标准GB5009.XX-XXXX给出的波长是630nm。两者差别不大。

8.老师，请问如何减少加标体积对样品稀释体积的影响？

选择好加标量后，无论选择哪个浓度的标准液进行添加，都要确保低于第一步的稀释倍数即定容的容量瓶的体积，实际添加时很好区分应该加哪个浓度的标准溶液。

9.老师，维生素b12传代用专用培养基还是LB？

都可以，莱士曼氏乳杆菌比其他的维生素测定菌株需要的营养成分更精细，最好选用专用的，保证菌株活性。

10.老师，叶酸和VB12检测时，在待测液制作环节时，您强调培养基煮沸后立即晾凉，我们实际应用是煮沸后自然晾晾，没有立即冷却，煮沸后到培养基使用大概用时2h。

要立即冷却，培养基加热时间长会颜色变深，破坏营养成分，煮沸后的培养基是轻微浑浊的，冷水浴后会发现培养基变得澄清。

11.B12第二次调pH调到6.8不好调，那最终是看静止的pH还是摇动的时候的pH？

吸取5mL到50ml小烧瓶中后，加入约20mL的水，这样就能保证PH计探头浸到液体里，用0.01moL的盐酸和氢氧化钠调PH，浓度太大控制不好。一边摇匀一边测定，最终看静止读数。

12.B12第二次调pH调到6.8不好调，那最终是看静止的pH还是摇动的时候的pH？

吸取5mL到50ml小烧瓶中后，加入约20mL的水，这样就能保证PH计探头浸到液体里，用0.01moL的盐酸和氢氧化钠调PH，浓度太大控制不好。一边摇匀一边测定，最终看静止读数。

13.老师，生物素测定时，制备好的菌悬液可放多长时间？

一般24小时没有问题，但也不建议储存太长时间。按照样品的数量和报数日期，合理安排时间准备菌悬液，尽量使用新鲜培养的菌悬液。

14.容量瓶的清洗有要求吗？

每个实验室都有玻璃容器的清洗规定，按照程序清洗即可，只是在清洗后，一定要170℃高温灭菌3h后待用，该步骤不是为了灭菌，而且是为了去除掉器皿表面残留的微生物代谢产生的维生素对目标物测定的影响。如果实验室有条件和空间允许，维生素测定用的玻璃器皿单独存放，不与其他实验混用。

15.老师，请问直接用质控样来控制试剂盒的检测结果可以吗？

可以，对于生产企业，建议和质控样一起，用自己的产品作为试剂盒验证的样品。

16.sc煮沸灭菌，请问：煮沸几分钟合适？

SC的灭菌方式参考培养基适用说明，一般的煮沸灭菌目测培养基彻底溶解，溶液清亮为宜，SC培养基含有蛋白胨，主要使蛋白胨彻底溶解，分装保存即可。

17.生物素试剂盒法和国标方法如果每年有方法比对，方法比对结果比较好，可不可以直接用试剂盒法

即使每年的比对结果比较理想，也不建议直接用是试剂盒法，这是一种持续能力保持的体现，如果方法比对结果比较好，品牌更换不频繁，建议扩大产品适用范围、用不同含量的样品对试剂盒测试等来验证试剂盒的效能。