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【答疑汇总】乳制品微生物实验室技能提升培训系列答疑之一:微生物法测定维生素篇(一)

放大字体  缩小字体 发布日期:2022-05-09
核心提示:2022年4月26-28日乳制品微生物实验室技能提升培训班线上直播完美收官课程结束后小伙伴们提出了工作中的一些疑问虽然老师进行了耐
 2022年4月26-28日

乳制品微生物实验室技能提升培训班

线上直播完美收官

课程结束后

小伙伴们提出了工作中的一些疑问

虽然老师进行了耐心的解答

小伙伴们感觉有些问题理解不到位

希望有文稿版的

利于巩固学习

小编根据小伙伴们反馈的问题

对于老师们的答疑进行一一整理

由于内容较多

将分批分享给大家

请各位小伙伴查收今日份的知识

 


 


1.微生物试剂盒法测定中,试剂盒测定结果与传统法结果差别大的原因是什么?

传统试管法和试剂盒方法原理相同,但反应体系、培养时间都有差异,但实际中发现两种方法结果未有太大差异,如果两种方法结果差异较大,建议从人、机、料、法、环等各个细节查找原因,关键要熟练操作。


 


 

 

2.微生物试剂盒法测定中,不同人员在相同条件下测定结果差别大的原因是什么?

 

 

 

微生物法测维生素,无论是传统法还是试剂盒,建议实验室固定每个项目的检验人员,至少保证一个项目2个人员操作,以保证数据的稳定,然后制定SOP规定不同人员操作的变异系数差异允许范围。




 

3.微生物试剂盒法测定中,怎样确保样品稀释在标准曲线之内?

 

 

如果是样品类型和含量比较固定,依靠经验常规重复操作即可。如果是未知样品,首先参考标签标识,按照标准的含量推算和预判含量,如果不能确定某一个含量,一个样品做2-3个稀释度,保证某一个稀释度在标曲范围内。


 


 

4.微生物法测定中,空白对照混浊如何解决?

 

 

空白对照有未接种空白和接种空白两种,如果是未接种空白浑浊,除去培养基基质的问题,最大的可能就是污染;接种空白浑浊,除去培养基和污染的因素,还有一个原因就是菌株发生变异,建议纯化到MRS平板上,再挑单菌落,在进行传代,如果还是不理想,建议更换菌株。




 

 

5.老师,如果我的穿刺保藏的工作菌株保存3个月(标准规定保存1个月)后仍能传代存活,是否可以继续使用?

 

 

 

 

标准上是一个月传一代,目的为了保证菌株的活性。如果一定要保存3个月,中间应该增加对菌株的验证,反倒麻烦。


 


 

 

6.叶酸和VB12检测时,在待测液制作环节时,您强调培养基煮沸后立即晾凉,我们实际应用是煮沸后自然晾晾,没有立即冷却,煮沸后到培养基使用大概用时2h

 

 

 

立即冷却,避免培养基颜色变深。


 


7.老师,理解玻璃器皿泡酸是为了使器皿更加干净,具体原因是什么呢?

 

都是为了保证玻璃器皿无残留,洗刷方式可以根据各自实验室规定的操作过程进行操作,最终目的就是为了洗刷干净无残留。高温烘干这步是必须的。


 


 

8.老师,请问从种子培养液中接种到接种液中,接种量是i多少? 接种量不同会对结果有影响吗?种子培养液为什么在接种到培养液,是为了活化传代吗?

 

 

为了增加活性,如果是传代的话一般100微升。接种量不同对结果没有影响,培养时间可能会有改变。


 


9.老师,加标的中间液是灭菌前加入还是灭菌后?还是哪一个步骤加进去?

 

是灭菌前加入,为了保证和样品处理再同一条件下。


 


 

10.老师,我可以用吸光度值为横坐标,生物素含量为纵坐标绘制标准曲线吗?

 

 

可以,看操作习惯,但是标准中明确了生物素含量为横坐标。


 


 

11.四个维生素实验中避光是自然光还是所有光源?

 

 

避开自然光。


 


12.生物素测定在调pH值时,超过了规定的pH之后,可以用盐酸调回来吗,会影响结果吗?

 

不可以用HCl调回,如果需要pH值调回,需要用H2SO4不额外引入氯离子。


 


13.用玻璃具塞试管可以代替钢管帽吗?

 

这里的玻璃具塞说的是胶塞是么,不建议使用,一是胶塞不能放到170以上的烘干箱烘干。而是在灭菌过程中气体压力改变会导致体积发生变化。实验室可以订制不锈钢材质的试管帽。


 

 


14.是否可以增加S2-S10的标曲浓度,如 乘以十倍?

 

标准给出的浓度范围,是菌液和标准出现适宜浓度梯度的范围,如果提高浓度,可能导致标准曲线没有梯度,实验失败。


 


15.老师,请问进行生物素试剂盒法方法验证时,是需要用质控样还是用市场购买的奶粉就行?还有,是只需要采用试剂盒方法测定结果计算精密度、准确度等,还是要同时进行国标法测定后进行两种方法的结果比较

 

方法验证是对该试剂盒在本实验室内的使用和国标的符合程度,在人员不足、工作量较大的情况下作为国标方法的替代,所以对照的样品建议用本工厂内的样品,也可以购买质控样和市售产品,对验证的样品进行国标法的检测,再在同样的实验条件下,用试剂盒对该样品测定,实验室自己设置可以接受的变异范围,然后对试剂盒的效果评价,参与评价的因素一定要包括准确度和精密度,由于试剂盒本身有检出限和定量限,建议联系试剂盒的供应商参与验证。可以参考的标准《商品化食品检测试剂盒方法评价》(SN/T2775-2011);《微生物检测方法确认和验证指南》(RBT033-2020)。



编辑:songjiajie2010

 
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关键词: 乳制品
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