答：GB 4789.2-2022中要求每个样品选择1-3个适宜的稀释度进行检测。对于不知道菌落大该是多大生物数量级别时，一定要多做几个稀释度；即使一个样品已经基本可以确定了菌落数了，也建议多检测一个稀释度，多一个稀释度也会对检测结果进行验证，只测一个稀释度会存在风险。

2.如何保证检测结果的有效性？

答：检验过程中需要做空白对照，用来判断培养基、稀释液、平皿或吸管是否存在污染。同时需要定期检测空气洁净度，判断实验室环境是否符合标准要求，如洁净工作台就要求百级（沉降菌<1CFU/皿）。

3.菌落总数计数同一个稀释度一个在计数范围，一个不在计数范围，怎么计？

答：同一稀释度的两个平板，一个在计数范围内，一个不在计数范围内，则以在计数范围内的平板的菌落数乘以稀释倍数作为报告结果。举例说明，某样品检测结果：10-1两平板菌落数分别为320、288，10-2稀释度两平板菌落数为27、23，则样品的检测结果应选取288进行报告，报告结果为2.9*10³CFU/g。

4.菌落总数检测中，所有稀释度菌落都多不可计，记录结果怎么写？

答：GB4789.2-2022中要求：若所有稀释度平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。但是遇到这种问题也分两种情况，若是平板上的菌落数可计但超过300CFU，可以按照国标要求进行；若平板上的菌落数过多，导致无法准确计数，建议对样品进行复测，复测时可增加1-2个稀释度。 

5.平行对照板结果相差较大菌落数的原因？

答：平行板结果相差较大可能是由于样液未完全混匀，导致菌落分布不均匀，实验过程中应使用拍打式均质器拍打1min~2min或者使用均质杯8000r / min~10000r/min均质 1min~2min，使样液混合均匀。

6.低稀释度平板菌落数少于高稀释度平板菌落数的原因是？ 

答：产品中加入防腐剂或者抑菌物质，做第一个稀释度的时候，由于浓度大，防腐剂的含量也大，会抑制细菌的生长，第二、第三个稀释度的时候由于浓度小，防腐剂的含量也相对少了，抑菌作用也小，所以出现这种情况；

B.产品本身呈酸性，需要添加石炭酸溶液调节pH至中性，否则会出现低稀释度比高稀释度平板菌落数少。

7.做菌落总数检测时，没有菌落是怎么回事？

答：

首先，要确认下是不是样品的问题，某些检测样品经过高温杀菌之后，本身就没有太多菌，所以没有菌落也是正常的。

其次，过程操作有没有问题，比如用于检测的稀释液使用时是不是温度太高，或者倒培养基时培养基温度过高，亦或者培养基质量问题、培养箱温度偏低等。

最后，检测时选择的稀释度过高，也可能导致没有菌落生长。

总之出现这种情况需要从各个方面进行分析。其实首先就应该确认样品本身，很多检测样品检测平板不长菌落也是正常的。

8.菌落总数的单位CFU与个有什么区别？

答：菌落形成单位叫做CFU。CFU的含义是形成菌落的菌落个数，不等于细菌个数。(比如两个相同的细菌靠得很近或贴在一起，那么经过培养这两个细菌将会形成一个菌落，此时就是2个细菌，1CFU。)菌落总数往往采用的是平板计数法，经过培养后我们计数出平板上所生长出的菌落个数，从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，于是以CFU/ml或CFU/g报告。

9.菌落蔓延的原因及解决办法？

答：菌落蔓延主要有两个原因，一是操作不当；二是样品中含有变形杆菌等运动性强的细菌。 操作中需要注意3个关键点： 

A. 倾注培养基时摇晃平皿使其混合均匀，减少菌块；

B. 样品稀释后，尽快倾注平板。从稀释到倾注结束时间控制在30 分钟之内，避免样液干涸造成菌落成团；

C.平板凝固后马上倒置若样品中含有变形杆菌，则可以覆盖一层培养基。但是用此法时，最好做一对照，因为有一种观点认为：此法会使菌落数减少。

A：如果平板上食品颗粒与菌落形态较为接近，为了避免和细菌菌落发生混淆，可多倾注一块平板置于4℃冰箱中放置，在计数时用于对照。另外也可以在已融化而保温在46℃水浴的PCA中加入0.5%TTC溶液，培养后食品颗粒不变色，细菌为红色。注意TTC的浓度不要过高，会有抑制细菌生长作用（食品检测一般不建议使用TTC，会有一定的抑菌效果）。

11.为什么平板计数琼脂需要调节pH？

答：培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。平板计数琼脂是用来检测样品中的菌落总数的，而大部分细菌都是嗜中性的，所以需要调节培养基pH至7.0±0.2，保证细菌生长环境的适宜，从而确保检测结果的准确性。

12.为什么平板计数琼脂需要高压蒸汽灭菌，而结晶紫中性红胆盐琼脂只需煮沸灭菌？

答：培养基灭菌是为了避免外部带入的菌对检测结果造成影响。平板计数琼脂为非选择性计数培养基，需要高压蒸汽灭菌杀死所有外源的孢子和芽孢，才能准确计数样品中的菌落总数。结晶紫中性红胆盐琼脂是检测大肠菌群的，大肠菌群没有孢子和芽孢，所以煮沸灭菌即可。

13.为什么菌落总数培养条件为36±1℃培养48±2h，而水产品要求30±1℃培养72±3h？

A：对于没有经过任何加工的水产品，其菌落总数培养条件为30±1℃培养72±3h。因为水中本身温度较低，未加工的水产品中微生物主要来源于水体，30℃、72h是水中微生物最适培养温度和时间。而加工水产品和其他产品培养条件都是36±1℃培养48±2h，其实就是产品本身的菌和加工过程中带入的菌的最适培养温度和时间不同的问题。