于同一批号的三个运输包装中至少抽取12个最小销售包装样品，1/4样品用于检测，1/4样品用于留样．另1/2样品（可就地封存）必要时用千复检。抽样的最小销售包装不应有破裂，检验前不得启开。

在100级净化条件下用无菌方法打开用千检测的至少3个包装，从每个包装中取样，准确称取10g土1g样品。剪碎后加人到200mL灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。液体产品用原液直接做样液。

如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50mL递增．直至能吸出足够测试用样液。在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。

本方法适用于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。

1 操作步骤

待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数。共接种5个平皿．每个平皿中加入1mL样液．然后用冷却至45℃左右的熔化的营养琼脂培养基15~20mL倒入每个平皿内混合均匀。待琼脂凝固后翻转平皿35℃士2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。

2 菌落总数计算

X1--细菌菌落总数CFU/g或CFU/mL

A--营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数；

K--稀释度。

当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。

如果样品菌落总数超过本标准的规定，按B2.3进行复检和结果报告。

3 复检方法

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到本标准的规定，则判定被检样品合格；其中有任何1次结果平均值超过本标准规定，则判定被检样品不合格。

1 操作步骤

取样液5mL接种50mL乳糖胆盐发酵管，置35℃士2℃培养24比如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。

如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，置35℃士2℃培养18~24h，观察平板上菌落形态。典型的大肠菌群为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落．

取疑似菌落1~2个作革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35℃士2℃培养24h，观察产气情况。

2 结果报告

凡乳糖胆盐发酵管产酸产气．乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性，可报告被检样品检出大肠杆菌。

1 操作步骤

取样液5ml,加人到50mLSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃士2℃培养18~24h如有绿脓杆菌生长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六炾三甲基漠化钦琼脂平板，置35℃士2℃培养18~24h，观察菌落特征。绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。

取可疑菌落涂片作革兰氏染色．镜检为革兰氏阴性菌者应进行下列试验：

氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验、42℃生长试验

绿脓菌素试验：取2~3个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃士2℃培养24h,加人三氯甲烧3~5mL，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烧呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。

2 结果报告

氧化酶及绿脓杆菌试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出绿脓杆菌。

如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出绿脓杆菌。

1 操作步骤

取样液5mL．加人到50mLSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃士2℃培养24h。

自上述增菌液中取1~2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置35℃士2℃培养24~48h在血琼脂平板上该菌落呈金黄色．大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。

挑取典型菌落，涂片作革兰氏染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄状，无芽胞与荚膜。镜检符合上述情况，应进行下列试验：

甘露醇发酵试验：取上述菌落接种甘露醇培养液，置35℃士2℃培养24h，发酵甘露醇产酸者为阳性。

血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆．挑取菌洛分别与生理盐水和血浆混合，5min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无 凝固则为阳性，如两者均无凝固则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验；

试管法：吸取1:4新鲜血浆0.5ml，放灭菌小试管中，加人等量待检菌24h肉汤培养物0.5mL。混匀，放35℃士2℃温箱或水浴中．每半小时观察一次．24h之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各0.5mL作为阳性与阴性对照。

2 结果报告

凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。

1 操作步骤

取样液5mL加入到50mL葡萄糖肉汤，35℃士2℃培养24h。

将培养物划线接种血琼脂平板，35℃士2℃培养24h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。

挑取典型菌落作涂片革兰氏染色镜检，应为革兰氏阳性，呈链状排列的球菌．镜检符合上述情况，应进行下列试验：

链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2rnL(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀．吸取上清液），加人0,8mL灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌24h肉汤培养物0.5mL和0.25％氯化钙0.25ml，混匀放35℃士2℃水浴中，2min观察一次（一般10min内可凝固），待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2h内不溶化，继续放置24h观察，如凝块全部溶化为阳性，24h仍不溶化为阴性。

杆菌肤敏感试验：将被检菌菌液涂布血平板上，用灭菌摄子取每片含0.04单位杆菌肤的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35℃士2℃下放置18~24h，有抑菌带者为阳性。

2 结果报告

镜检革兰氏阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈链激酶和杆菌肽试验阳性．可报告被检样品检出溶血性链球菌。

1 操作步骤

待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作真菌计数。共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的沙氏琼脂培养基15~25mL倒人每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置25℃士2℃培养7天，分别于3、5、7天观察，计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准．

2 结果报告

X2--真菌菌落总数，CFU/g或CFU/mL；

B--5块沙氏琼脂培养基平板上的真菌菌落总数；

K--稀释度。

当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。

如果样品菌落总数超过本标准的规定，进行复检和结果报告。

3 复检方法

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果都达到本标准的规定，则判定被检样品合格；其中有任何1次结果超过本标准规定，则判定被检样品不合格。

1 操作步骤

取样液5mL加人到50mL沙氏培养基中、25℃士2℃培养7天，逐日观察有无真菌生长。

2 结果报告

培养管混浊应转种沙氏琼脂培养基，证实有真菌生长，可报告被检样品检出真菌。