1 培养基的购置与验收

1.1 购置

微生物检验用的各种药品、试剂和干粉培养基必须是专业厂家生产的产品,质量必须符合有关的质量标准,并且生产商应提供培养基的名称、产品编号、批号、各种成分和任何补充成分、培养基使用前的pH值贮存资料及有

效期等信息,以利于使用者对产品进行记录和比较。应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业；企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。

1.2 验收

购买的培养基到货后，应有专人做好接受和验收工作，应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测，满足检测方法规定的要求后方可投入使用。

2 培养基的储存

干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；未开瓶的培养基保存期限应按照生产厂家提供的信息执行，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并尽快用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。

3 培养基的制备

3.1 培养基用水

培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。

3.2 称量

称量时要用专用的角匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。干粉培养基应严格按照生产商提供的有关说明准确配制。

3.3 复水

复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热,最多只能加热两次,第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。

3.4 灭菌

培养基应按培养基配方中 规定的条件及时进行灭菌，通常是121℃ 15 min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定，并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。

3.5 pH测定

微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。灭菌前后PH会有所变化，所以灭菌前就要准备好，可以用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL调整，注意不可反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。

3.6 配制好的培养基保存

灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。所以建议平板倾注后立即使用。保存时,尽可能贮存在不会改变其成分的条件下，即避光或在4 ℃ ~ 12℃冰箱密闭保存。如果保存时间超过2d,应将其放人密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期,应将其放在带有螺旋盖的试管或其他密闭的试管或容器中防止蒸发。

4 培养基的性能测试

4.1 外观控制

制备好的培养基应有相应的颜色，一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化，是否蒸发/脱水。

4.2 污染控制

从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试（无菌试验），确定无微生物生长方可使用。

4.3 性能测试

4.3.1 测试菌株选择 

测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株，应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株，菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。

4.3.2 定量测试方法 

改良Miles-Misra法：测试菌株过夜培养物10倍递增稀释；测试平板和参照平板划分为4个区域并标记；从最高稀释度开始，分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域；将稀释液涂满整个1/4区域，37°C培养18小时；对易计数的区域计数，按公式计算生长率（生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数）。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1 。

4.3.3 半定量测试方法 

改进的划线法接种法：平板分ABCD四区，共划16条线，平行线大概相隔0.5cm，每条有菌落生长的划线记作1分，每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分，没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分，分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长，而非目标菌的生长应部分或完全被抑制，目标菌的生长指数G大于6时，培养基可接受 。

4.3.4 定性测试方法 

平板接种观察法：用接种环取测试菌培养物，在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养，目标菌应呈现良好生长，并有典型的菌落外观、大小和形态，非目标菌应是微弱生长或无生长 。

5 讨论

培养基的质量是微生物实验室检测工作的基础，事关检测工作的准确性、可靠性，在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在工作中忽视任何一个环节的质量问题，都将导致检验结果科学性、客观性的偏离。因此，加强培养基的实验室质量控制，认真地做好培养基的质控工作，不断完善和提高培养基的质控水平，才能为微生物检测实验室提供高质量的培养基。