2 在空白出现菌落的时候需要去分析哪一步出现问题,人机料法环。当然空白出现菌落的时候,那么该批次的菌落总数数据都作废处理。在制样和做样的时候需要在百级的环境(百级的洁净工作台)下进行。
3 稀释液的均匀性,这个会影响结果,刚开始的时候可能会造成同一梯度的两个结果相差有点远,这个是因为做的时候没有把稀释液均匀。如果前后两个梯度没有梯度性,那么就是在做稀释做不好。这个都是靠多做,技术才会提高。(当然还有一种情况,样品是中添加了抑菌物质,这样没有梯度性。)
1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits , CFU )表示。
2 选取菌落数在 30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU的平板记录具体菌落数,大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。(这个是很多新手会问的一个问题)
4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每 g ( mL )样品中菌落总数结果。
2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式( 1 )计算:
3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。
6 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU~300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 时,则以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。