４－甲基咪唑是一种存在于焦糖剂中的化学物质。它是在生产焦糖色素时产生的。焦糖色素能使可乐饮料变成棕褐色。在实验中发现，4-甲基咪唑能导致动物长肿瘤，有可能给人体带来致癌风险。

世界卫生组织允许在食物中添加含有4-甲基咪唑的焦糖色素，且对于4-甲基咪唑的剂量有所界定，即每千克不能超过200毫克。中华人民共和国标准GB 8817-2001《食品添加剂 焦糖色（亚硫酸铵法、氨法、普通法）》中规定，4-甲基咪唑在液体食品中含量小于0.02%，即每千克液体中4-甲基咪唑含量小于200毫克，与世界卫生组织要求相同。

      在标准GB 8817-2001《食品添加剂 焦糖色（亚硫酸铵法、氨法、普通法）》中，要求实验中所用试剂和仪器设备除特别注明外，均采用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水及实验室常用仪器设备。4-甲基咪唑的测定主要采用薄层色谱法来进行检测。

薄层色谱法具有快速、简单等特点。但是相比液相或气相色谱来说，存在定性错误的可能性，如果被测物质和标准物质不是同一个物质，而他们的保留时间一致，则会产生定性错误。因此，很多地方选择使用液相色谱来检测4-甲基咪唑，并出台了相应的地方标准。下面将根据河北省地方标准DB13/T 1116-2009《焦糖色中的4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法》对检测方法做介绍。

6分析步骤

6.1 样品处理 准确称取3g样品（精确至0. 001 g)，加15mL水溶解，移入250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸钠溶液15 mL，加三氯甲烷一无水乙醇萃取液60 mL，剧烈振摇5 min。静置分层后，将有机相移入另一分液漏斗中，水相再按同样方法萃取一次，合并有机相；用100 g/L碳酸钠溶液洗涤提取液3次，每次30mL。然后将有机相通过无水硫酸钠滤入旋转蒸发瓶中，50℃浓缩至近干，取下，以水溶解残渣并定容至10mL，经0.45μm微孔膜过滤后供HPLC分析。

6. 2测定

6.2.1 HPLC参考条件

分析柱：C18, 4. 6 mm×250 mm粒度5 μm。

流动相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（(pH 3. 5，含0. 1％庚烷磺酸钠）=5: 95。

波长：210nm。

流速：1. 0 mL/min。

6.2.2标准曲线：分别进标准系列溶液各10 μL，进行HPLC分析，然后以峰面积为纵坐标，以4一甲基咪唑的含量为横坐标，绘制标准曲线。

6.2.3试样测定：吸取6. 1处理后的试样溶液10 μL进行HPLC分析，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中4一甲基咪唑的含量

7结果计算

试样中4一甲基咪唑的含量按下式计算：

 

 

式中：

X一试样中4一甲基咪唑的含量，单位为毫克每千克（mg/kg) ;

c一由标准曲线上查得进样液中4一甲基咪唑的量，单位为微克每毫升（μg/mL) ;

V一试样稀释液总体积，单位为毫升（mL) ;

m一试样质量，单位为克（g) ;

计算结果保留两位有效数字。

在使用液相色谱检测时，要求必须使用符合中华人民共和国标准GB 6682-2008的一级水。其他各种标准溶液的配置最少需要用到二级水。瑞枫特别提供Direct-Pure EDI与PURIST的组合套装，可以提供高纯水及超纯水，满足全方位的实验室用水需求。Direct-Pure EDI高纯水系统选用Siemens公司的EDI，以自来水为进水，提供稳定优质的高纯水，产品达到同类产品先进水平。PURIST系列超纯水系统，精致小巧，使用简便；它以纯水为进水，生产超纯水。水质超过或达到GB以及ASTM、CAP、CLSI的一级水标准。该组合套装，可以保证用户在使用中用水无忧。瑞枫纯水系统已通过FCC、CE等多种认证，同时有专业的验证工程师，提供所需的验证服务支持，以及通过各种标准所需的3Q认证，有助于协助用户通过GMP、GLP等体系认证，让用户在使用高品质产品的同时，享受到专业周到的服务。

为更好地保护HPLC仪器，一般上样前需将溶液预先过滤，除掉溶液中颗粒及微生物，防止色谱柱堵塞、损坏泵等情况发生，从而保证仪器的操作性能及延长仪器使用寿命。为此，瑞枫提供PES、PTFE、Nylon、MCE等多种针头式过滤器，适用于各种有机相及水相的样品过滤。

 

    据专家声称，虽然４－甲基咪唑有比较大的危害性，但只要它是正规食品添加剂焦糖中的物质，含量在允许的范围内，那么对人体将不会有太大的损害。按照人们正常消费水平，如果4-甲基咪唑不超出人体每日允许摄入量，则不能得出危害健康的结论。迄今为止，尚未见到食品中4-甲基咪唑导致人体损害的临床报道。