大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至10mL营养肉汤培养基中，35～37℃培养18～24小时；

分别取培养液1mL加0.9%无菌氯化钠溶液，采用10倍递增稀释法，稀释至10^-5~10^-7，制成每1ml含菌数10～100CFU的菌悬液。

【大肠埃希菌】取相当于1g或1mL供试品的供试液至100mL胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入大肠埃希菌10～100CFU，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培养18～24小时，取此培养物按《微生物限度检查SOP》大肠埃希菌项下规定检查。

【大肠菌群】取含适量（不少于10ml）的胆盐乳糖发酵培养基管3支，分别加入含供试品1g或1mL 、0.1g或0.1mL、含供试品0.001g或0.001mL的供试液，阳性菌对照加入大肠埃希菌10～100CFU，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培养18～24小时，按《微生物限度检查SOP》大肠菌群项下规定检查。

【沙门菌】 取供试品10g或10mL，直接或处理后接种至适量（不少于200mL）的营养肉汤培养基中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，阳性菌对照加入沙门菌 10～100CFU，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌10～100CFU，35～37℃培养18～24小时。按《微生物限度检查SOP》沙门菌项下规定检查。

【铜绿假单胞菌】取相当于1g或1mL供试品的供试液至100mL胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入铜绿假单胞菌10～100CFU，阴性菌对照加入大肠埃希菌10～100CFU，35～37℃培养18～24小时。按《微生物限度检查SOP》沙门菌项下规定检查。

【金黄色葡萄球菌】取相当于1g或1mL供试品的供试液至100mL胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入金黄色葡萄球菌10～100CFU，阴性菌对照加入大肠埃希菌 10～100CFU，35～37℃培养18～24小时。按《微生物限度检查SOP》金黄色葡萄球菌项下规定检查。

取规定量供试液，如供试液含许多药渣，先以500转/分钟离心3~5分钟，取全部上清液，再以3000转/分离心20分钟，取下面1mL液体，并将适量的稀释剂洗涤管底的洗涤液一并移入同瓶增菌液中，培养，本法适用于中度抑菌作用的样品。

在供试品溶液中加入相应的中和剂，以减除供试品中抑菌成分的作用，中和剂应对微生物无毒性，与抑菌成分结合后的产物应对微生物亦无毒性，或有毒性但不影响待检菌的检出。