苦参总生物碱中含有苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱等生物碱类成分，苦参碱的含量测定有报道用气相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)，但样品处理方法较复杂。2006年采用HPLC法测定制剂中苦参碱的含量，该方法操作简便、快速、准确、重现性好，可用于妇得康洗剂的质量控制。

 

1、仪器和试药

 

高效液相色谱LC-6A(日本岛津)；TCQ-250超声波清洗仪(北京医疗设备二厂)；电子天平AEG-220(日本岛津)；紫外分光光度仪UV-265(日本岛津)；甲醇为优级纯；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：110805-200306)。妇得康洗剂由贵阳舒美达制药厂有限公司提供(批号：20041001、20041002、20041003、20041004、20041101、20041102、20041103、20041201、20041202、20041203)。

 

2、方法与结果

 

2.1 色谱条件

 

DiamonsilC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相乙腈-甲醇-磷酸盐溶液(25∶10∶65)；检测波长220nm；流速1ml/min；柱温25℃。

 

2.2 供试品溶液的制备

 

取本品50ml，摇匀，精密量取5ml，加浓氨试液调pH＝10后，用氯仿(30、30、30、20、20ml)提取5次，合并提取液，挥干氯仿，加甲醇适量溶解残渣，滤过，滤渣、容器用甲醇洗涤3次，每次5ml，合并洗液与滤液，定量转移至100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

 

2.3 对照品溶液的制备

 

取经P2O5减压干燥至恒重的苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每毫升约含0.530mg的对照品溶液。

 

2.4 阴性对照品溶液的制备

 

取缺苦参总生物碱的样品适量，依供试品溶液的制备法，制备阴性对照品溶液。

 

2.5 系统适用性试验

 

分别取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，阴性对照无干扰。理论塔板数为8128。

 

2.6 线性关系考察

 

精密称取苦参碱对照品适量，依对照品溶液制备法制备浓度0.106、0.318、0.530、0.742、0.954g/L的溶液，分别精密吸取上述溶液5μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品质量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：Y=38788X－53(r=0.9998)，表明苦参碱在0.53~4.77μg呈线性关系。

 

2.7 精密度试验

 

精密吸取上述苦参碱对照品溶液，重复进样5次，测定苦参碱峰面积，RSD为1.58%，表明精密度良好。

 

2.8 稳定性试验

 

精密量取本品适量，依供试品溶液制备法制备供试品溶液，再精密吸取供试品溶液10μl，依上述色谱条件在0、2、4、6、8h分别进行测定，记录峰面积，RSD为1.49%，表明供试品溶液在8h内基本稳定。

 

2.9 重复性试验

 

分别精密量取同一样品5份，依供试品溶液制备法制备5份供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10μl，依上述色谱条件测定，RSD为0.95%，表明该方法的重复性良好。

 

2.10 加样回收率试验

 

精密量取0.5ml已知含量(35.767g/L)的妇得康洗剂5份，分别添加苦参碱对照品适量，按上述供试品溶液制备法制备加样回收供试品溶液，并进行测定，计算回收率，见表1。结果苦参碱的平均回收率为98.6%，RSD为1.17%。

 

2.11 样品测定

 

精密量取样品适量，依供试品溶液制备法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件测定，记录苦参碱峰面积，重复测定2次，取平均值。结果见表2。表1苦参碱的加样回收率试验结果210批样品中苦参碱的含量

 

3、讨论

 

3.1 检测波长的选择

 

精密称取干燥至恒重的苦参碱对照品适量，用流动相溶解配成标准溶液，对苦参碱标准溶液进行全波长扫描，结果表明标准溶液在200nm处有最大吸收，考虑紫外吸收末端干扰大，且样品中苦参碱含量高，故选择检测波长为220nm。

 

3.2 流动相的选择

 

选择了3种流动相：(1)乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶9)，氢氧化钠溶液调节pH至6.0；(2)乙腈-0.005mol/L庚烷基磺酸钠溶液(25∶75)；(3)乙腈-甲醇-磷酸盐溶液(25∶10∶65)。经多次测试结果表明，流动相(1)峰分离不好，流动相(2)的峰型不好，出现脱尾现象，流动相(3)出峰时间合理，峰型好，分离度大于1.5。

 

3.3 萃取次数的考察

 

取妇得康洗剂5ml，加浓氨试液调pH＝10后，分别用氯仿(30、30、30、20、20、20ml)提取3、4、5、6次，合并提取液，挥干氯仿，加甲醇适量溶解残渣，滤过，滤渣，容器用甲醇洗涤3次，每次5ml，合并洗液与滤液，定量转移至100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，通过比较峰面积，5次萃取基本可将苦参碱萃取完全。

 

3.4 根据对10批样品的测定值，暂定本品含苦参总生物碱以苦参碱(C15H24N2O)计，每瓶不得少于0.24g。