（4-氨基安替比林分光光度法）

一、原理

酚类化合物于pH10.0±0.2介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比林反应，生成橙红色的吲哚酚氨基安替比林染料，其水溶液在510nm波长处有最大吸收。

用光程长为20mm比色皿测量时，酚的最低检出浓度为0.1mg/L。

二、仪器

1．500mL全玻璃蒸馏器。

2．分光光度计。

三、试剂

实验用水应为无酚水。

1．无酚水：于1L水中加入0.2g经200℃活化0.5h的活性炭粉末，充分振摇后，放置过夜。用双层中速滤纸过滤，或加入氢氧化钠使水呈强碱性，并滴加高锰酸钾溶液至紫红色，移入蒸馏瓶中加热蒸馏，收集馏出液备用。

注：无酚水应贮于玻璃瓶中，取用时应避免与橡胶制品（橡皮塞或乳胶管）接触。

2．硫酸铜溶液：称取50g硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）溶于水，稀释至500mL。

3．磷酸溶液：量取50mL磷酸（密度_20℃=1.69g/mL），用水稀释至500mL。

4．甲基橙指示液：称取0.05g甲基橙溶于100mL水中。

苯酚标准贮备液： 称取1.00g无色苯酚溶于水，移入1000mL容量瓶中，稀释至标线。至冰箱内保存，至少稳定一个月。

标定方法：

(1)吸10.00mL酚贮备液于250mL碘量瓶中，加水稀释至100mL，加10.0mL0.1mol/L溴酸钾-溴化钾溶液，立即加入5mL盐酸，盖好瓶盖，轻轻摇匀，于暗处放置10min。加入1g碘化钾，密塞，再轻轻摇匀，放置暗处5min。用0.0125mol/L硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色，加入1mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去，记录用量。

(2)同时以水代替苯酚贮备液作空白试验，记录硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液用量。

(3)苯酚贮备液浓度由下式计算：

               苯酚（mg/mL）=15.68×c×(V₁-V₂)/V

式中：V₁——空白实验中硫代硫酸钠标准滴定溶液用量(mL)；

V₂——滴定苯酚贮备液时，硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液用量（mL）;

V——取用苯酚贮备液体积(mL)；

c——硫代硫酸钠标准滴定溶液浓度(mol/L)；

15.68——1/6C₆H₅OH摩尔质量(g/mol)。

6．苯酚标准中间液：取适量苯酚贮备液，用水稀释至每毫升含0.010mg苯酚。使用时当天配制。

7．溴酸钾-溴化钾标准参考溶液(c_1/6KBrO3=0.1mol/L)：称取2.784g溴酸钾(KBrO₃)溶于水，加入10g溴化钾(KBr),使其溶解，移入1000mL容量瓶中，稀释至标线。

8．碘酸钾标准参考溶液(c_1/6KIO3=0.0125mol/L)：称取预先经180℃烘干的碘酸钾0.4458g溶于水，移入1000mL容量瓶中，稀释至标线。

9．硫代硫酸钠标准溶液(c_{Na2S2O3·5H2O}≈0.0125mol/L)：称取3.1g硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的水中，加入0.2g碳酸钠，稀释至1000mL，临用前，用碘酸钾溶液标定。

标定方法：

取10.00mL碘酸钾溶液置250mL容量瓶中，加水稀释至100mL，加1g碘化钾，再加5mL(1+5)硫酸，加塞，轻轻摇匀。置暗处放置5min，用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，加1mL淀粉溶液， 继续滴定至蓝色刚褪去为止，记录硫代硫酸钠溶液用量。按下式计算硫代硫酸钠溶液浓度(mol/L)：

c(Na₂S₂O₃·5H₂O)=0.0125×V₄÷V₃

式中：V3——硫代硫酸钠标准溶液消耗量(mL)；

V4——移取碘酸钾标准参考溶液量(mL)；

0.0125——碘酸钾标准参考溶液浓度(mol/L)。

10．淀粉溶液：称取1g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，加沸水至100mL，冷后，置冰箱内保存。

11．缓冲溶液(pH约为10)：称取20g氯化铵(NH₄Cl)溶于100mL氨水中，加塞，置冰箱中保存。

注：应避免氨挥发所引起pH值的改变，注意在低温下保存和取用后立即加塞盖严，并根据使用情况适量配置。

12． 2%(m/V)4-氨基安替比林溶液：称取4-氨基安替比林(C₁₁H₁₃N₃O)2g溶于水，稀释至100mL，置于冰箱中保存。可使用一周。

注：固体试剂易潮解、氧化，宜保存在干燥器中。

13． 8%(m/V)铁氰化钾溶液：称取8g铁氰化钾{K₃[Fe(CN)₆]}溶于水，稀释至100mL，置于冰箱内保存。可使用一周。

四、测定步骤

1．水样预处理

(1)量取250mL水样置蒸馏瓶中，加数粒小玻璃珠以防暴沸，再加二滴甲基橙指示液，用磷酸溶液调节至pH4（溶液呈橙红色），加5.0mL硫酸铜溶液(如采样时已加过硫酸铜，则补加适量)。

如加入硫酸铜溶液后产生较多量的黑色硫化铜沉淀，则应摇匀后放置片刻，待沉淀后，再滴加硫酸铜溶液，至不产生沉淀为止。

(2)连接冷凝器，加热蒸馏，至蒸馏出约225mL时，停止加热，放冷。向蒸馏瓶中加入25mL水，继续蒸馏至馏出液为250mL为止。

蒸馏过程中，如发现甲基橙的红色褪去，应在蒸馏结束后，再加1滴甲基橙指示液。如发现蒸馏后残液不呈酸性，则应重新取样，增加磷酸加入量，进行蒸馏。

2．标准曲线的绘制：于一组8支50mL比色管中，分别加入0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00、12.50mL酚标准中间液，加水至50mL标线。加0.5mL缓冲溶液，混匀，此时pH值为10.0±0.2，加4-氨基安替比林1mL，混匀。再加1mL铁氰化钾，充分混匀后，放置10min立即于510nm波长，用光程为20mm比色皿，以水为参比，测量吸光度。经空白校正后，绘制吸光度对苯酚含量(mg)的标准曲线。

3．水样的测定：分取适量的馏出液放入50mL比色管中，稀释至50mL标线。用与绘制标准曲线相同的步骤测定吸光度，最后减去空白实验所得吸光度。

4．空白试验：以水代替水样，经蒸馏后，按水样测定步骤进行测定，以其结果作为水样测定的空白校正值。

五、计算

挥发酚(以苯酚计，mg/L)=1000×m/V

式中：m——由水样的校正吸光度，从标准曲线上查得的苯酚含量（mg）；

V——移取馏出液体积(mL)。

注意事项

如水样含挥发酚较高，移取适量水样并加至250mL进行蒸馏，则在计算时应乘以稀释倍数。