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内标法和外标法都是常用的定量分析方法，在不同的分析条件下，面对不同的要求，再加上分析成本和效率等因素的考虑，灵活选用简单而有效的定量方法很重要。那么，如何选用内标法或外标法？它们各有什么优缺点？本期我们特整理了相关内容，希望对大家有所帮助！
| 01. 外标法定义及优缺点
| 02. 内标法定义及优缺点
| 03. 选用案例解析
一、外标法定义及优缺点
1. 什么是外标法？
用待测组分的已知浓度的标准溶液（作为对照物）绘制校准曲线，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法，称为外标法。
具体做法是：用待测组分的标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。
若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。
2. 外标法优缺点
优点：
（1）操作、计算简单；
（2）无需各组分都被检出、洗脱；
（3）适用于大量样品的分析。
缺点：
（1）实验条件要求高，标样及未知样品的测定条件要一致，如：检测器的灵敏度，流速、流动相组成不能发生变化；
（2）进样体积要准确，每次进样体积要有好的重复性。
二、内标法定义及优缺点
1. 什么是内标法？
内标法是一种间接的校准方法，是在建立校准曲线时，每个校准序列里加入相同量的物质作为内标物，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。
具体做法是：在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱柱所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。
内标法定量图例
2. 内标法的优缺点
一般用外标法来定量，如果进样体积很难掌握，就用内标法，可以消除进样体积的误差。那内标法有哪些优点和缺点，一起看一下：
优点：
进样量的变化、色谱条件的微小变化，对内标法定量结果的影响不大，特别是在样品前处理（如浓缩、萃取、衍生化等）前加入内标物，然后再进行前处理时，可部分补偿欲测组分在样品前处理时的损失。若要获得很高精度的结果时，可以加入数种内标物，以提高定量分析的精度。
缺点：
（1）内标法必须每个样品中都加入内标物，增加了工作量也增加了成本；
（2）在进行多组分分析时，必须保证内标物有足够的分离度，加大了方法建立难度；
（3）作为内标物的要求较高，并不容易选择。
3、 内标物的选择原则
对于内标法定量分析来说，内标物的选择是极其重要的。内标物必须满足如下的条件：
（1）内标物必须是试样中不存在的物质；
（2）应当是纯净的己知化合物，且内标物和被测组分要有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如：沸点、极性、化学结构等)、色谱行为和响应特征；
（3）必须完全溶于被测样品(或溶剂)中，且不与被测样品起化学反应并与试样中各组分的色谱峰能完全分离；
（4）加入的内标物的量应接近于被测组分；
（5）色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近或在几个被测组分色谱峰中间。且又不共溢出，目的是为了避免仪器的不稳定性所造成的灵敏度的差异；
（6）选择合适的内标物加入量，使得内标物和被分析物质二者峰面积的匹配性大于75%，以免由于它们处在不同响应值区域而导致的灵敏度偏差。
三、选用案例解析
其实，内标法与外标法都是定量的一种方法，至于哪一种方法好与不好，不能一概而论，还是要不同情况不同分析，我们摘取了几个网友的案例，方便大家理解：
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案例1
“以前做过很多医药、农药中间体的芳香族卤代化合物的常量定量分析，没有自动进样器，用外标法定量，确实重现性与稳定性非常差。
其实，仔细分析原因不一定就是外标法不适合这种定量分析，首先我们应确认实验室仪器和条件是否调整到了一种稳定而合理的状态。
比如，衬管是否洁净，玻璃棉的位置是否合适恰当（能否使样品尽可能的汽化），汽化温度是否合适，色谱峰形是否对称（也就是样品与色谱柱健合相是否匹配），附近有没有其它色谱峰的干扰，选用什么进样方式（如快速进样还是热针进样）。
如果这些因素都考虑了，按照GMP方法验证对于精密度的要求，同一样品进6针以上的RSD和配制6个样品的定量结果RSD都能满足小于1.5%的要求，那么这个方法用外标法就是完全适用的。在做过的许多出口产品的定量分析方法当中，有许多是一些医药公司提供的比较完善而验证过的方法，内标与外标都有（用的都是自动进样），精密度都能满足RSD小于1.5%的要求。
当一个方法能够满足测试要求的时候，无论内标外标，都是可行的。当然有一个分析成本和分析时间的问题，内标的成本和控制溶液、样品溶液的配制当然要比外标要高和麻烦一些了。
而有些时候，可能受你实验室现有仪器和附属设备的影响，达不到一定的要求，还必须进行定量分析，有时外标的结果可能就要差一些。这时，你可能就要考虑用内标法了，可以排除手动进样的误差、分流歧视的影响、包括一些未知因素平行误差的影响，这时内标可能就显示出它的优势来了。”
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案例2
“ 对于微量分析，比如农药和兽药残留的分析、环境分析等，根据不同的限量标准要求，对于精密度的要求也比常量分析的要求要宽松得多，RSD有时可以允许达到10%甚至更高，这时可能外标法有更大的应用空间。”
文章来源：网络
