一、目的与要求：

1.掌握双硫腙比色法测定铅含量的原理与方法。

    2.熟悉72工型分光光度计的工作原理和使用方法。

    二、原理：

    样品经消化后，在PH8.5-9.0时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲烷，加入柠檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标准系列比较定量。   

    三、试剂：  

    l、1：1氨水；    、

    2、6N盐酸：量取100毫升盐酸，加水稀释至200ml。

    3、酚红指示液：0.1％乙醇溶液。  

    4、20％盐酸羟胺溶液：称取20克盐酸羟胺，加水溶解至约50ml，加2滴酚红指示液，加1：1氨水，调PH至8.5-9.0(由黄变红，再多加2滴)用双硫腙-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去再用三氯甲烷洗二次，弃去三氯甲烷层，水层加6N盐酸呈酸隆，加水至100毫升。 

    5、20％柠檬酸铵溶液：称取50克柠檬酸铵，溶于100毫升水中，加2滴酚红指示液，加l：1氨水，调PH至8.5-9.0，用双硫腙-三氯甲烷溶液提取数次，每次10-20ml，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷层，再用三氯甲烷洗二次，每次5ml，弃去三氯甲烷层，加水稀释至250毫升。

    6、10％氰化钾溶液；   

    7、三氯甲烷；不应含氧化物。

    (1)检查方法：量取10ml三氯甲烷，加25ml新煮沸过的水，振摇3分钟，静置分层后，取10ml水液，加数滴15％碘化钾溶液及淀粉指示液，振摇后应不显蓝色。

    (2)处理方法：于三氯甲烷中加人工1／10-1／20体积的20％硫酸钠溶液洗涤，再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的l／10馏出液，收集中间馏出液备用。

     8、淀粉指示液：称取0.5克可溶性淀粉，加5ml水搅匀后，慢慢倒入lOOml沸水中，随到搅拌，煮沸，放冷备用。用时配制。

    9、1％硝酸：量取1ml硝酸，加水稀释至100ml。  

    10、双硫腙溶液：0.5％三氯甲烷溶液，保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。

    称取0.5克研细的双硫腙，溶于50ml三氯甲烷中，如不全溶；可用滤纸过滤于250m1分液漏斗中，用1：99氨水提取三次，每次100ml，将提取液用棉花过滤至500m1分液漏斗中，用6N盐酸调至酸性，将沉淀出的双硫腙用三氯甲烷提取2-3次，每次20ml，合并三氯甲烷层，用等量水洗涤二次，弃去洗涤液，在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的双硫腙置硫酸干燥器中，干燥备用。或将沉淀出的双硫腙用200，200，100ml三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷层为双硫腙溶液。  

11、双硫腙使用液：吸取1.Oml双硫腙溶液，加三氯甲烷至10ml，混匀。用：1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长510nm处测吸光度(A)下式用算出配制100m1双硫腙使用液(70％透光率)所需双硫腙溶液的毫升数(N)。      

                 V =(10(2-lg70))/A=1.55/A

12、铅标准溶液：精密称取0.1598克硝酸铅，加10ml1％硝酸，全部溶解后，移入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于lml铅。             

13、铅标准使用液：吸取1.0ml铅标准溶液，置于100毫升容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于10mg铅。   

四、仪器：

    1、所用玻璃仪器均用l0-20％硝酸浸泡24小时以上，用自来水反复冲洗，最后用水冲洗干净。

    2、分光光度计。  

五、操作方法：

1、样品消化

(1)硝酸-硫酸法

a、酱、酱油、醋、豆腐乳、酱腌菜等：称取10.0克样品(或吸取10.Oml液体样品)，置于250ml定氮瓶中，加数粒玻璃珠，lOml硝酸，放置片刻，小火加热、待作用缓和，放冷，沿瓶壁加入1％硝酸，再加热，至瓶中液体开始变成棕色时，不断沿瓶壁滴加硝酸有机质分解完全。加热火力，至产生白烟，溶液应澄清无色或微带黄色，放冷。在操作过程中应注意防止爆炸。

    加20ml水煮沸，除去残余的硝酸至产生白烟为止，如此处理两次，放冷。将冷后的溶液移入50ml或lOOml容量瓶中用水洗涤定氮瓶，洗液并容量瓶中再放冷，加水至刻度，混匀。定容后的溶液每lml相当于2g样品或2ml样品．  

b、含酒精性饮料或二氧化碳饮料：吸取10.Oml样，置于250ml定氮瓶中，加数粒玻璃珠，先用小火加热除去乙醇或二氧化碳，再加lOml硝酸，混匀后，以下按(a)自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每10ml相当于2m1样品。   

c、含糖量高的食品：称取1.0克样品，置于250ml定氮瓶中，先加少许水使湿润，加数粒玻璃珠，10ml硝酸，摇匀，缓缓加入10ml硫酸，待作用缓和停止起泡沫后，先用小火缓缓加热(糖分易炭化)，不断沿瓶壁：加硝酸，待泡沫全部消失后，再加大火力，至有机质分解完全发生白烟，溶液应澄清无色或微带黄色，放冷。以下按a自“加20ml水煮沸”起依法操作。  

    以上湿法消化要同时作空白试验。

    (2)灰化法   

    a、糕点及其他含水分少的食品：称取5.0克样品，置于坩埚中，加：至炭化，然后移入高温炉中，500℃灰化3小时、放冷，取出坩埚，加l ml 硝酸、湿润灰分，用小火蒸干，在500℃灼烧1小时，放冷，取出坩埚。加lml 硝酸，加热，使灰分溶解，移入50ml容量瓶中，用水沸涤坩埚,洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。

    b、含水分多的食品或液体样品：称取5.0克或5.0ml样品，置于蒸发皿中，先在水浴上蒸于，再按a自“加热至炭化”起依法操作。

    2、测定

     吸取10.Oml消化后的定容溶液和同量的试剂空白液，分别置于125ml分液漏斗中，各加水至20ml。

吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml铅标准使用液(相当于0、 1、2、3、4、5mg铅)分别置于125m1分液漏斗中，各加1％硝酸溶液至20ml。    

于样品消化液，试剂空白液和铅标准液中各加2m120％柠檬酸铵溶液，lml20％盐酸羟胺溶液和2滴酚红指示液，用1：1氨水调至红色，再各加2ml10％氰化钾溶液，混匀。各加5.Oml  硫腙使用液，剧烈振摇1分钟，静置分层后，三氯甲烷层经脱脂棉滤人1cm比色杯中，以零点于波长5lOnm处测吸光度，绘制标准曲线比较。

   计算：   

         X=((A₁—A₂)×1000)/( m×V₂/V₁×1000)

    X：样品中铅的含量，mg／kg或mg／L；

    A₁：测定用样品消化液中铅的含量，mg；

    A₂：试剂空白液中铅的含量，mg；

    M：样品质量(体积)，克(m1)；

    V₁：样品消化液的总体积(m1)；

    V₂：测定用样品消化液体积，m1。