对液相色谱仪的要求

1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。 

2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如，甲醇等)，因为，纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗，清洗方法：

①以异丙醇作溶剂冲洗；

②放在异丙醇中间用超声波清洗；

③用10％稀硝酸清洗；
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的
流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

常见故障断定及解决方法

(一)保留时间变化 

1.柱温变化：柱恒温，必要时需配置恒温箱
2.等度与梯度间未能充分平衡：至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3.缓冲液容量不够：用》25mmol/L的缓冲液
4.柱污染：每天冲洗柱
5.柱内条件变化：稳定进样条件,调节流动相
6.柱快达到寿命：采用保护柱

(二)保留时间缩短 
1.流速增加：检查泵,重新设定流速
2.样品超载：降低样品量
3.键合相流失：流动相pH值保持在3~7.5检查柱的方向
4.流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀
5.温度增加：柱恒温

(三)保留时间延长 
1.流速下降：管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
2.硅胶柱上活性点变化：用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
3.键合相流失：同前(二)3
4.流动相组成变化：同前(二)4
5.温度降低：同前(二)5

(四) 出现肩峰或分岔
1.样品体积过大：用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
2.样品溶剂过强：采用较弱的样品溶剂
3.柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
4.柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
5.进样器损坏：更换进样器转子

(五)鬼峰
1.进样阀残余峰：每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
2.样品中未知物：处理样品
3.柱未平衡：重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) ：每天新配,用抗氧化剂
5.水污染(反相) ：通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

(六) 基线噪声 
1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气：加柱后背压
2.污染(随机噪声) ：清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂
3.检测器灯连续噪声：更换氘灯
4.电干扰(偶然噪声) ：采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)
5.检测器中有气泡：流动相脱气,加柱后背压

(七)峰拖尾 
1.柱超载：降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
2.峰干扰：清洁样品,调整流动相
3.硅羟基作用：

加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
4.同前(四)4 同前(四)4
5.同前(四)3 5.同前(四)3
6.死体积或柱外体积过大：
连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管
7.柱效下降：
用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱

(八)峰展宽 
1.进样体积过大：同(四)1
2.在进样阀中造成峰扩展L进样前后排出气泡以降低扩散
3.数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点
4.检测器时间常数过大:设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
5.流动相粘度过高:增加柱温,采用低粘度流动相
6.检测池体积过大:用小体积池,卸下热交换器
7.保留时间过长:等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8.柱外体积过大:将连接管径和连接管长度降至最小
9.样品过载:进小浓度小体积样品