一、用途

军团菌乳胶凝集检测试剂用于快速确证鉴定从选择性平板上分离出的可疑嗜肺军团菌和常规分离的军团菌。试剂盒适用于检测由疑似嗜肺军团菌引起的肺炎病人的样品或环境样品。试剂盒可分别检测嗜肺军团菌血清1群和2-15群和常规分离的军团菌。(根据临床微生物检测手册提及嗜肺军团菌血清16群，血清16群与血清6型交叉反应，因此理论上2-15群乳胶试剂也与血清16群凝集)。该试剂盒仅供专业人员使用。

二、原理

测试试剂1，乳胶颗粒表面包被与嗜肺军团菌血清1群具有特异性的兔多克隆抗体。测试2-15群试剂的乳胶颗粒表面包被与嗜肺军团菌血清2-15群特异性的多克隆兔抗体。军团菌菌种测试试剂，乳胶颗粒表面包被与10种常规分离的军团菌血清具有特异性的兔多克隆抗体。（参见以下表格）当乳胶颗粒与含军团菌或者从相关的军团菌加热灭活的抗原的悬液混合后，发生免疫化学反应，使乳胶颗粒迅速凝集。血清1群抗体包被的乳胶颗粒只在遇到血清1群的抗原时才会发生凝集，同样，血清2-15群抗体包被的乳胶颗粒只有在遇到血清2-15群中的任何一种抗原时，才会发生凝集。军团菌抗体包被的乳胶颗粒与10种相关的军团菌会发生凝集。（参见以下表格）

血清1群乳胶试剂与血清1群抗原的反应比血清2-15群乳胶试剂与血清2-15群抗原的反应较快较强。其原因为在生产过程中2-15群抗体的混合彼此有一定的稀释作用。军团菌乳胶与嗜肺军团菌血清1乳胶试剂的作用方法相同。

三、试剂盒组成成分

REAG TEST 1  1群测试试剂　HM45a 军团菌血清1群乳胶试剂　2.5mL

乳胶颗粒包被与嗜肺军团菌血清1群特异性的兔多克隆抗体和鼠单克隆抗体。含0.099%的叠氮化钠。（蓝色瓶盖）

REAG TEST 2-15  2-15群测试试剂　HM45b 军团菌血清2-15群乳胶试剂　2.5mL

乳胶颗粒包被与嗜肺军团菌血清2-15群特异性的兔多克隆抗体。含0.099%的叠氮化钠防腐剂。（黄色瓶盖）

CONTROL +  阳性对照试剂　HM45c　阳性对照　1.0mL

可与测试试剂1和2-15反应的不具活性的军团菌的抗原，含0.099%的叠氮化钠防腐剂。（黑色瓶盖）

REAG TEST SPECIES   军团菌菌种测试试剂 HM45d 军团菌血清特殊乳胶试剂 2.5mL

乳胶颗粒表面包被与10种常规分离的军团菌血清具有特异性的兔多克隆抗体。（参见以下表格）

含0.099%的叠氮化钠防腐剂。（红色瓶盖）

NaCl 0.85%   0.85%盐水　HM40　0.85%生理盐水　5.0mL

含0.099%的叠氮化钠防腐剂。（白色瓶盖）

使用说明书

检测板

搅拌棒

需要的其它材料

l  接种环

l  军团菌选择性分离培养基

l  用于煮沸处理的玻璃试管

l  0.85%生理盐水

四、警告和注意事项

安全：

1、试剂仅供体外诊断使用。

2、试剂盒作防腐剂使用的叠氮化钠可与铅或铜制品反应形成易爆的金属叠氮化物。可用大量水冲洗以避免叠氮化物的堆积。

3、在处理或检测可疑致病菌时应采取适当的预防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸钠消毒处理30分钟。含酸的废液应作中和处理。

4、阳性对照液在生产中已作惰性处理。但在使用中，依然应遵循潜在传染性产品的处理程序。

检测过程：

1、试剂盒应按说明书使用。

2、所有试剂在使用前应达到室温。

3、不要稀释试剂盒内的任何试剂。

4、不要混合不同批次试剂盒的试剂。

5、不要冷冻试剂盒内的试剂。

6、不要使检测乳胶试剂的滴管接触到阳性对照试剂或细菌样品。

7、注意凝集状态，呈凝乳状或纤维状可能为非真实凝集。

8、使用前应确保检测板清洁干燥。

五、贮存及保质期

检测试剂盒不使用时应贮存在2～8℃，并应在包装盒标签上的有效期内使用检测试剂。

六、样本

检测选择性分离平板上分离的可疑军团菌菌落。

七、检测过程

质量控制：

在每次使用检测试剂盒前应作下列质量控制检测，以确证试剂的有效性。

1、检测试剂的控制：轻轻摇匀测试试剂(HHM45a，HM45b，HM45d)，将两种测试试剂分别滴1滴于检测板的二个反应环内，接着在两个反应环内各滴1滴生理盐水(HM40)，用2支搅拌棒分别在整个区域内混匀测试液和生理盐水，轻摇检测板2分钟并观察是否会出现凝集。如果出现凝集反应，表明检测试剂或生理盐水受到污染，应废弃处理。

2、阳性对照的控制：滴1滴阳性对照试剂(HM45c)于1个反应环内，接着在该反应环内滴1滴混匀的测试试剂1(HM45a)，不要使检测乳胶试剂的滴管接触到阳性对照试剂。用搅拌棒在整个区域内混匀液体，轻摇检测板2分钟,应观察到凝集现象。重复上述步骤，做测试试剂2-15（HM45b）和军团菌菌种测试试剂（HM45d）的检测，并应观察到凝集现象。如果其中一种测试试剂未出现凝集反应，应采用新鲜的检测试剂盒。

测试程序：

1、各滴1滴生理盐水(HM40)于检测板的3个反应环内。

2、用接种环从选择性分离平板上挑取3～4个可疑军团菌菌落，分别在2个反应环内的生理盐水旁作涂片操作。

3、用搅拌棒在整个反应环内混匀生理盐水和菌落，形成均匀的较浓菌悬液。

4、如果菌悬液保持均匀状态，继续第7步。如果菌悬液出现纤维状或粒状物（培养物较老或呈黏液状时，易出现此种现象），按下述步骤操作。

5、往玻璃试管中加入0.5mL的生理盐水，从选择性平板中挑取可疑菌落制成均匀的菌悬液。

6、煮沸菌悬液5分钟，冷却至室温后，分别取30μL滴加在检测板上2个反应环内。

7、轻轻的摇匀测试乳胶试剂（HM45a,HM45b），形成均匀的悬液。

8、滴1滴测试试剂1于一个反应环内的菌悬液上，滴1滴测试试剂2-15于另一个反应环内的菌悬液上。不要使检测乳胶试剂的滴管接触到菌悬液。

9、各用1支干净的搅拌棒在整个反应环内混匀菌悬液和测试试剂。

10、轻摇检测板2分钟，并观察凝集结果。

11、记录结果后，将搅拌棒和检测板进行适当的消毒处理。

八、结果说明

观察凝集结果，按下表进行判断

*非特异性凝集不排除存在军团菌的可能性，只是结果不确定。

九、使用的局限性

1、结果应依据所有的临床和实验室信息进行判断。

2、纤维状凝集可能为假阳性结果，需进一步实验确证。

3、培养时间过长或黏稠培养物在生理盐水中不易形成均匀的菌悬液而出现非典型的凝集。因此要按上述的方法对培养物进行前处理。

4、HKM^®军团菌乳胶试剂盒用于检测选择性平板上分离出的可疑1-15群嗜肺军团菌。阳性结果的菌株应利用其在不含半胱氨酸的军团菌选择性平板上不生长的特性确证其为军团菌属。

十、检测效果对比

HKM^®军团菌乳胶试剂盒与一种已广泛使用的商业化的乳胶试剂盒检测效果对比，用二种商品检测分离出的嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌和易存在潜在交叉反应的菌株，共128株。

灵敏度　50/50＝100%

特异性　478/78＝100%

一致性　128/128＝100%

同时用HKM^® 军团菌乳胶试剂盒和对比试剂盒检测分离出的嗜肺军团菌和其它军团菌，共70株，以辨别嗜肺军团菌血清1群和血清2-15群。

＊           这组50株分离的菌株中，12株在两种检测试剂中均存在交叉反应。它们分别是金黄色葡萄球菌(4)、差异柠檬酸杆菌(1)、鲍氏不动杆菌(2)、斯氏普罗威登斯菌(1)、蜡样芽孢杆菌(2)、肺炎克雷伯氏菌(1)、链球菌属(1)。但所有这些菌株接种在军团菌选择性平板上培养时，均不生长或生长的菌落特征非常不典型。同时蜡样芽孢杆菌呈现非典型凝集(呈纤维状)。

＊            

所有分离出的嗜肺军团菌血清1群菌株与测试试剂2-15均无交叉反应，同样地，所有嗜肺军团菌血清2-15群菌株与测试试剂1均无交叉反应。所有分离的非嗜肺军团菌与HKM^®军团菌乳胶试剂盒中的两种测试试剂均无交叉反应。

军团菌菌种乳胶试剂与所有测试检查的嗜肺军团菌血清群都没有交叉反应。军团菌特殊乳胶试剂能检测以下10种军团菌：

军团菌菌种乳胶试剂的特异性实验显示legionella sainthelensi spp1,hacklaie spp1和 tucsonensis也能产生阳性结果。

十一、重复性

批内重复性：通过以系列稀释度的参照抗原和试剂盒对照抗原及一组47种细菌样品盘对同1批产品的灵敏度和特异性进行检测。由不同的操作者随机测试3次，最终效价由参照/对照抗原测定，并且3次定性分析结果完全一致。