(1)取镜:右手握镜臂,左手托底座(考虑到大部分人都是右手有力)
(2)安放:放有光,略靠左,镜臂朝自己。(考虑到大部分人都是右手执笔记录)
(3)对光:低倍物镜,大光圈,一起对准通光孔,左眼观,同时调节反光镜,直至看到明亮圆形光斑。(大光圈凹面镜视野光线强,小光圈平面镜视野光线弱,查看液泡的时候,需要光线弱点才能看清)
(4)放片:载物台,放玻片,保证标本在通光孔中间,便于观察。
(5)调焦:侧盯物镜,降下物镜至距离标本0.5CM,再通过目镜观察,向后旋粗准焦螺旋,镜筒升,看见物像再调细准焦螺旋。(如果调到头了没找到,再按要求重来一次,或者查看移动玻片保证标本在通光孔中央)
(6)观察:显微镜,成倒像,物向左,像向右,像在上,向上移,像往何处逃,玻片同向追。(注意:顺逆时针转动不变)
2.显微镜成像:
(1)放大倍数:目镜×物镜
目镜越短,放大倍数越大;物镜越短,放大倍数越小。
目镜和物镜通过是否有螺口来判断。
注意:放大的是长度,不是面积;长度放大10倍,面积放大102倍
(2)高低倍镜下物像特点的比较
放大倍数越大,看到的视野范围越小/细胞数量越少,光线越暗;放大倍速越小,看到的视野范围越大/细胞数量越多,光线越亮。
(3)成像:倒像 (上下左右都颠倒)
如果物像偏向右上侧,要使物像移动到视野中央,应该向右上移动玻片
3.用显微镜观察洋葱表皮细胞
(1)洋葱表皮临时装片的制作:
擦 |
用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净 |
目的是擦除载玻片上的污物 |
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滴 |
用滴管在载玻片的中央滴一滴清水 |
目的是保持细胞的原有形态 |
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取 |
用镊子从叶内侧撕取一小块透明薄膜 |
目的是取到适于观察的洋葱鳞片内表皮细胞 |
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展 |
将索取材料放于载玻片,展平 |
目的是防止细胞重叠 |
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盖 |
用镊子夹起盖玻片,使它的一边先接触载玻片上的水滴,然后轻轻的盖上。 |
目的是避免盖玻片下面出现气泡 |
|
染 |
在盖玻片的一侧滴加红墨水或稀碘液,用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引,使染液浸润标本的全部。 |
目的是使细胞着色,可以对其内部结构观察得更清晰 |
(2)注意事项:
A.用镊子撕取洋葱表皮时,先用刀片割“#”形,便于操作
B.加盖玻片时,防止产生气泡的方法:让盖玻片的一边先接触载玻片上的水滴,然后轻轻平放
C.吸水纸不但有利于染色,还能把多余的水分吸走,也能利于气泡排出。
D.如果出现以下问题,会采取相应的措施
现象 |
原因 |
对策 |
细胞有严重重叠现象 |
洋葱表皮细胞撕得太厚 |
重新撕几次,挑选较薄的表皮进行实验 |
洋葱表皮细胞未在载玻片上展平,甚至造成折叠现象 |
用镊子展平洋葱表皮后,重新制作装片 |
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细胞结构不太清楚 |
未滴加红墨水/碘液 |
滴加红墨水/碘液 |
有黑色圆圈 |
有气泡或气泡太多 |
重新盖盖玻片或重新制作装片 |
视野中无光斑或视野太暗等现象 |
显微镜操作失误,如反光镜未对好,光线过强、过弱或无光,物镜为对准通光孔,准焦螺旋转动过快 |
重新按正确的方法操作显微镜 |
4.用显微镜观察人体口腔上皮细胞
(1)步骤:
擦 |
用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净 |
滴 |
用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水 |
刮 |
用消毒牙签在漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下 |
涂 |
把牙签上附有碎屑的一端,放在载玻片上的0.9%生理盐水涂抹几下 |
盖 |
用镊子夹起盖玻片,使它的一边先接触载玻片上的水滴,然后轻轻的盖上,避免盖玻片下面出现气泡。 |
染 |
在盖玻片的一侧滴加亚甲基蓝/稀碘液,用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引,使染液浸润标本的全部。 |
(2)注意事项:
A.滴加生理盐水而不是清水,是为了使口腔上皮细胞保持原来的形态特点(防止吸水爆裂)。
B.漱口,除掉口腔中的食物残渣。
C.涂抹一定要均匀,防止细胞重叠。
D.由于口腔上皮薄而透明,所以要用亚甲基蓝溶液染色,观察时光线要调得暗一些。