离心是集中作用于所有不同密度粒子的自然力以加速自然分离过程的过程。它是通过试管中的密度来分离颗粒的。可以使用过滤或沉降方法进行离心。离心分离的核心是通过沉降分离。较密集的颗粒沉入容器底部,而较轻的颗粒保持悬浮。离心将置换密度甚至略有不同的颗粒,并受以下四个因素的影响:样品和溶液的密度,温度和粘度,粒子位移的距离,旋转速度。
01离心机种类
根据进样方式分为连续离心机和非连续流离心机(分批离心机)
连续 ( 流 ) 离心机:进样是连续进行的
非连续离心机(分批离心机):装一次样品后离心处理一次。
根据是否带制冷功能分为常温型离心机、冷冻型离心机和升温型离心机。
常温离心机:占地面积小,离心期间样品温度会因摩擦生热而上升。
冷冻离心机:后面或侧面装有压缩机以进行主动冷却,占地面积比非冷冻型大,在离心结束后不会自动打开离心机盖,根据不同的压缩机性能,可以在不同时间内将离心机冷却至所需温度。也可在长时间高速离心后仍保持设定温度。
升温型离心机: 部分特殊型号的离心机有加热功能,可以主动给样品加热,保证样品活性和质量。
不同的样品分离时所需离心力不同,因此根据相对离心力大小可以将离心机分为低速离心机(≤6000r/min)、高速离心机(≤25000r/min)、超高速离心机(≥30000r/min)。
低速离心机:当物料的粒径在1微米到50微米之间时,可以用低速离心机进行分离。通常用于细胞或者血液离心,最高离心力在几百到几千不等
高速离心机:能达到的离心力在 10,000 ~30,000×g 。分子生物学实验最常用的离心力范围是 14,000 - 20,000×g,病毒和细胞器的离心分离等应用需要 30,000 ×g的离心力。高速离心对离心管品质有较高要求。蛋白、核糖体、细菌溶解产物、病毒等物质的离心分离以及质谱用样品的制备,建议使用可耐受高离心力的离心管。分离直径约0.1~1微米的动植物组织中的病毒等物质时,推荐使用转速为10000~20000转,离心力约10000转的高速冷冻离心机。
超速离心机:离心力达到 30,000×g 以上。通常需要配备特殊的转子或者离心管来实现高速和高离心力。分离直径约0.002~0.1微米的各种蛋白质、DNA、RNA等成分时,需要超速离心机,转速在40000转/分以上,离心力要达到100000g~400000g。
根据离心机的大小,可放在工作台上的称为台式离心机,可放在地面上的称为落地式离心机。
落地式离心机:至少需要 1 平米的占地面积,可以节约实验台面空间,主要用于高速或大容量离心
台式离心机: 台式离心机有多种规格尺寸。根据尺寸分为以下2 类:
多功能离心机:离心腔体大、转子种类多。并提供多种规格和类型的适配器可供选择。最大可耐受离心力主要取决于离心耗材的性能
小型离心机:适用于微量离心管,占地面积小, 离心力为14,000 - 30,000×g,最多可以离心48个 1.5/2.0 mL 微量离心管。部分型号还可以离心15/50mL 离心管或者SBS标准规格的工作板。一般均提供冷冻和常温两种版本。
02离心原理
在离心力作用下,混合物质由于密度差异而沉积分离。离心时间由物质的密度和施加的离心力决定:
密度越大,越快沉降到达管底 ( 密度 = 质量 / 体积 )
离心力越大,离心分离时间越短
离心分离按照应用可分为离心沉降和离心过滤两种
离心沉降
利用悬浮液(或乳浊液)密度不同的各组分在离心力场中迅速沉降分层的原理,实现液 - 固或液 - 液 ( 相 ) 分离。日常实验应用有沉淀离心、密度梯度离心、等密度梯度离心等。
沉淀离心
是离心机最常见的应用,即通过离心使固体集聚沉淀在离心管底部从而与液体 ( 上清液 ) 分开。在相分离的过程中,溶质从分散状态或者溶液介质中转移到另外一种溶剂中 ( 来进行化学 / 分子生物学分析 )。
等密度梯度离心
是指在离心力场下,在密度梯度介质中,颗粒移动到与它们各自的密度恰好相等的位置,形成一系列密度区,从而使不同密度的物质得到分离。
离心过滤
使悬浮液在离心力场下产生的离心压力,作用在过滤介质上,使液体通过过滤介质成为滤液,而固体颗粒被截留在过滤介质表面,从而实现液 - 固分离。例如超滤膜离心分离纯化大分子物。
03如何选择合适的离心机
离心前请确保与参考实验方案使用相同类型的转子、相同的相对离心力、离心温度以及离心时间。总的来说,要想成功离心,主要参考以下参数:
(1)样品类型
(2)离心耗材
(3)离心机种类
(4)转子类型
(5)适配器类型
(6)相对离心力
(7)离心所需温度