一、引言

被污染的食品，包括奶制品和非奶制品，是李斯特氏菌散发或爆发的主要起源。李斯特氏为食源性致病菌，在自然界中广泛存在，并且为多种动物的肠道携带菌。因此对李斯特氏菌进行快速检测是非常重要的。

二、用途

李斯特氏菌乳胶凝集检测试剂用于初步鉴定选择性平板上分离出的可疑菌落，可结合生化分析对李斯特氏菌进行全面鉴定。

三、原理

乳胶颗粒表面包被与单增李斯特氏菌和格氏李斯特氏菌纯化鞭毛蛋白具有特异性的多价抗血清。与李斯特氏菌菌悬液混合后，乳胶颗粒可迅速凝集。达到检测灵敏度时，Microgen™李斯特氏菌乳胶凝集试剂盒可检测李斯特氏菌属的所有有动力菌株。

四、试剂盒组成成分

REAG TEST HM48a 李斯特氏菌乳胶测试试剂　2.5mL

乳胶颗粒包被与李斯特氏菌鞭毛抗原具有特异性的兔抗血清。含0.02%的硫柳汞防腐剂。

Positive Control HM48b　阳性对照　　0.5mL

含0.02%的硫柳汞防腐剂。

NaCl 0.85% 0.85%盐水　HM40　0.85%生理盐水　5.0mL

含0.1%的叠氮化钠防腐剂。

使用说明书

检测板

搅拌棒

需要的其它材料

l       接种环

五、贮存及保质期

检测试剂盒不使用时应贮存在2～8℃，不要冷冻试剂盒。在包装盒标签上的有效期内使用检测试剂。

六、警告和注意事项

安全：

1、试剂盒内的生理盐水含有0.099%的叠氮化钠作为防腐剂，叠氮化钠可与铅或铜制品反应形成易爆的金属叠氮化物。可用大量水冲洗以避免叠氮化物的堆积。

2、阳性对照液在生产中已作惰性处理。但在使用中，依然应遵循潜在传染性产品的处理程序。

3、在处理或检测可疑致病菌时应采取适当的预防措施。

检测过程：

1、试剂盒应按说明书使用。

2、不要稀释试剂盒内的任何试剂。

3、不要混合不同批次试剂盒的试剂。

4、不要使用过期产品。

5、不要冷冻试剂盒内的试剂。

6、注意检测过程中的质量控制部分。

7、注意凝集状态，呈凝乳状或纤维状可能为非真实凝集。

七、使用方法

所有试剂在使用前应达到室温。

从选择性平板中挑取可疑菌落可以用HKM^®李斯特菌乳胶凝集测试试剂，也可以直接使用HKM^®李斯特菌生化鉴定试剂条。（产品号MID－67）

1、使用含有七叶苷的选择性平板有利于区分七叶苷阳性的李斯特菌与七叶苷阴性的非李斯特菌。

2、菌落在测试前，应做氧化酶试验，氧化酶阳性菌株可引起错误的反应。李斯特菌属为氧化酶阴性菌。

3、只可测试光滑菌株，粗糙菌株在生理盐水中会自动凝集。

4、在30℃或以下温度培养时，鞭毛最多。

质量控制：

在每次使用检测试剂盒前应作下列质量控制检测，以确证试剂的有效性。

1、检测试剂的控制：滴1滴生理盐水(HM40)于一个测试反应环内，并在同一反应环内滴1滴测试试剂(F48a)混匀液体，轻摇检测板1分钟并观察是否会出现凝集。应无凝集发生。如果出现凝集反应，表明检测试剂或生理盐水受到污染，应废弃处理。

2、阳性控制：滴1滴阳性对照试剂(HM48a) 于一个测试反应环内，并在同一反应环内滴1滴测试试剂(HM48a)，不要使检测乳胶试剂的滴管接触到阳性控制试剂。用搅拌棒在整个区域内混匀液体，轻摇检测板2分钟并观察结果。出现易于判断的凝集反应，表明试剂正常有效。

测试程序：

从选择性平板中挑取可疑菌落进行测试

1、取1张检测板放在工作台上。

2、滴1滴生理盐水(HM40)于检测板的一个反应环内。

3、用接种环或搅拌棒从选择性分离平板上挑取可疑菌落，与反应环内的生理盐水混合，形成均匀混浊的菌悬液。

4、观察是否会出现自动凝集现象。如果菌悬液保持均匀状态，继续第5步。

5、摇匀乳胶测试试剂后，滴加1滴于菌悬液中，不要使检测乳胶试剂的滴管接触到菌悬液。用1支干净的搅拌棒混匀菌悬液和测试试剂，轻摇检测板。混匀后，废弃的搅拌棒应作适当的消毒处理。

6、在2分钟内观察凝集结果。

7、记录结果后，将检测板进行适当的消毒处理。

八、结果说明

在2分钟内出现凝集，表明样品中有李斯特氏菌，如不出现凝集，表明测试菌落中无李斯特氏菌或存在数量低于可测量的水平。

九、使用的局限性

1、李斯特氏菌的粗糙菌株可在生理盐形成非特异性自动凝集，因此不可用于乳胶试剂盒检测。

2、在30℃以上培养的菌株可能不产生鞭毛，因此可导致假阴性结果。

3、不能检测无动力的李斯特氏菌。

4、部分葡萄球菌和革兰氏阳性杆菌可引起假阳性结果。

5、乳胶凝集检测为初步鉴定结果，所有的阳性结果的纯培养物应作进一步的生化分析。（如使用产品编号为MID－67的MID李斯特氏菌鉴定试剂条）

十、检测效果测试

用HKM^®李斯特氏菌乳胶凝集检测已知的105株李斯特氏菌的菌落，检测结果确证为这些菌株。

 
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