本标准规定了食品中菌落总数(Aerobicplatecount)的测定方法。

本标准适用于食品中菌落总数的测定。

2术语和定义

3.2 冰箱：2℃~5℃。

3.4 天平：感量为0.1g。3.3 恒温装置：48℃±2℃。

3.5 均质器。

3.7 无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。

3.8 无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。

3.9 无菌培养皿：直径90mm。

3.11 放大镜或/和菌落计数器。加一个试管和配套试管塞（尺寸15*150mm）

4  培养基和试剂

4.2 菌落总数测试片

4.3 磷酸盐缓冲液

4.4 无菌生理盐水

6  操作步骤

6.1  样品的稀释

6.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1∶10的样品匀液。

6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1∶10的样品匀液。

6.1.3 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1∶100的样品匀液。

6.1.4 按6.1.3操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择1个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

6.1.6 及时将15mL~20mL冷却至46℃~50℃的平板计数琼脂培养基(可放置于48℃±2℃恒温装置如：恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

6.2  培养

6.2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL)，凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。

6.2.2 如使用菌落总数测试片,应按照测试片所提供的相关技术规程操作。

6.3  菌落计数

6.3.1 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits，CFU)表示。

6.3.2  选取菌落数在30 CFU~300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

6.3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。

6.3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

7  结果与报告

7.1 菌落总数的计算方法

7.1.3 若所有稀释度的平板菌落数均＜30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

7.1.4 若所有稀释度的平板上菌落数均＞300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

7.1.5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU 之间,其中一部分＜30CFU 或＞300CFU 时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

7.2.1 菌落数小于100CFU 时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。

7.2.2 菌落数大于或等于100CFU 时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用 0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。

7.2.3 若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。

7.2.4 称重取样以 CFU/g为单位报告,体积取样以 CFU/mL为单位报告。