GB 4789.40-2024《食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺检验》为上述标准之一。标准于2024年2月8日发布，将于2024年8月8日正式实施。

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本文通过对比克罗诺杆菌检验2024版与2016版标准，使读者更好地了解2024版修订的变更，以便更好地掌握克罗诺检验的发展方向。

本标准与GB4789.40-2016相比主要变化如下：

--修改了标准名称，删除了阪崎肠杆菌，修改为“食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌检验”。

--标准适用范围增加了婴幼儿辅助食品;

--增加了PCR鉴定方法作为选做内容;

--删除了挑取黄色菌落和生化鉴定中的产黄色素和苦杏仁苷项目;

--修改了培养基和试剂pH调节方法;

--修改了预热、选择性增菌温度以及TSA平板的培养温度和时间;

--修改了生化反应的培养温度及氨基酸培养基的制备。

5.1 前增菌和选择性增菌

取检样 100g(mL)置于无菌容器中,加入900mL已预热至 41℃±1℃的 BPW,用手缓缓地摇动至检样充分溶解后,36℃±1℃培养18h±2h。轻轻摇动混匀培养过的前增菌液,移取1mL转入10mLmLST-Vm肉汤中,41.5℃±1℃培养 24h±2h。

5.2 分离

5.2.1 轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物,使用10μL接种环各取1环增菌培养物,分别划线接种于2个克罗诺杆菌显色培养基平板,36℃±1℃培养24h±2h,或按培养基要求条件培养。

5.2.2 可疑菌落按显色培养基要求进行判定,每个平板挑取至少 5个可疑菌落(不足5个时挑取全部可疑菌落) ,分别划线接种于TSA平板,36℃±1℃培养 24h±2h。

3.增加PCR鉴定方法：随着微生物检验对快速方法的检测需求， GB标准中引入PCR法，即可节省检测时间，减少工作量，又可以提高结果的准确性，实现对可疑菌落高通量的筛选。

5.4 确证试验

选做5.3时,自PCR结果阳性的TSA平板上挑取菌落进行生化鉴定, PCR结果阴性的TSA平板不再进行生化鉴定。

未选做 5.3时 ,直接将 5.2.2的可疑菌落接种TSA平板后进行生化鉴定。

可以首先鉴定克罗诺杆菌显色培养基平板上最具特征性的菌落接种的TSA平板上的菌落。如果是阳性,则不需要测试其他TSA平板上的菌落。如果是阴性,则选取其他TSA平板上的菌落进行鉴定,直到全部为阴性或发现阳性菌落为止。为确保结果的准确性,对TSA平板上的菌落进行鉴定时,应使用新鲜的传代菌落。克罗诺杆菌的主要生化特征见表3。 

上述鉴定也可选择商生化特征见表3。上述鉴定也可选择商品化生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统进行 。

6 结果与报告

根据菌落特征、确证试验(生化鉴定)和/或PCR鉴定结果,报告 100g(mL)样品中检出或未检出克罗诺杆菌。

7 操作步骤

7.1 样品的稀释

取检样100g(mL)、10g(mL)、1g(mL)各3份,分别置无菌容器中,分别加入900mL、90mL、9mL已预热至41℃±1℃的BPW,用手缓缓地摇动至检样充分溶解,制成1:10样品匀液,36 ℃±1℃培养18h±2h。轻轻摇动混匀培养过的前增菌液,分别移入1mL转入10mLmLST-Vm肉汤,41.5℃±1℃培养24h±2h。

7.2 分离、鉴定

同5.2、5.3和5.4。

8 结果与报告

综合菌落特征、确证试验(生化鉴定)或 PCR鉴定结果,根据检出克罗诺杆菌的阳性管数,查MPN检索表,报告100g(mL)样品中克罗诺杆菌的MPN值(见附录C中表 C.1) 。