据世界卫生组织估计,每年全世界有数千万人感染沙门氏菌,数十万人因此死亡。
在我国,沙门氏菌食物中毒多年来一直位居细菌性食物中毒的首位。过去几年,我国各地通报了多起沙门氏菌感染事件。
●2020年10月1日广东省卫生健康委公布1起突发公共卫生事件,为珠海报告的一起沙门氏菌食物中毒,发病48例,无死亡。
● 2020年9月6日,四川成都一幼儿园部分幼儿和教师相继出现发热腹泻等症状,疾控中心对幼儿园9月1日、9月2日的所有食品留样进行检测,发现9月1日留样的外购生日蛋糕中沙门氏菌呈阳性。
● 2019年10月,江西省南昌市多家医院共接收疑似食物中毒病例50例。经查,食物中毒系食用江西卡拉多食品有限公司生产的“爆浆松松”和“流心泡芙”所致。
江西卡拉多食品有限公司10月30日晚发布公开信称,经过监管部门和专家的深入调查,事件发生原因系生产过程中机器设备故障而造成“爆浆松松”相关产品“沙门氏菌”超标,导致食品污染。
● 2017年7月,网红餐厅“一笼小确幸”在上海的4家门店均被食客投诉吃后拉肚子,甚至高烧挂盐水,共致71人就医。
7月28日,原上海市食药监局发布情况通报称,该餐厅违规的加工即时食品受到了沙门氏菌污染,进而引起了食物中毒事件。
●2016年9月5日至6日,河北保定高阳县50余人在火锅店就餐感染沙门氏菌,引起食物中毒。
什么是沙门氏菌
沙门氏菌的检验标准及限量要求
我国沙门氏菌的现行检验标准为GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》。
食品安全国家标准对沙门氏菌的限量控制是针对即食类预包装食品。GB 29921-2013中对肉制品、水产制品、即食蛋制品等11种即食预包装食品中沙门氏菌的限量要求均为:n=5, c=0,m=0 CFU。《食品安全国家标准散装即食食品中致病菌限量》(征求意见稿)和GB14934-2016《食品安全国家标准消毒餐(饮)具》规定沙门氏菌不得检出。而欧美等地,除根据人群和产品的风险等级设置n(5~60)外,还针对如牛、猪、鸡胴体等畜禽肉原料也进行了限量控制,限量值均为:n=50~82(视类别不等), c= 1~26(视类别不等),m=0 CFU。我国目前对畜禽肉原料的沙门氏菌限量值尚无明确要求,但随着人群消费习惯的变化以及生产模式趋向模块化,有必要加强对整个食物链的安全防控。
沙门氏菌检测
1 前增菌
25g(ml)检样放入225ml缓冲蛋白胨水BPW(Buffered Peptone Water)均质(建议拍打式均质器),36℃±1℃培养8~18h。
酸性或碱性样品需用1mol/mL无菌氢氧化钠或盐酸调节pH至6.8±0.2,用试纸测量。
2 增菌
摇动增菌培养物,移1ml转种于10ml四硫磺酸钠煌绿TTB增菌液中,42℃±1℃培养18~24h。适合除伤寒副伤寒沙门氏菌培养。浅黄色。
同时,移1ml转种于10ml亚硒酸盐胱氨酸SC增菌液中,36℃±1℃培养18~24h。
3 分离
3.1 用接种环取增菌液1环,划线接种,36℃±1℃培养40~48h。
典型菌落为黑色或褐色,亚利桑那菌为黑色有金属光泽。
3.2 三种平板任选其一,用接种环取增菌液1环,划线接种,36℃±1℃培养18~24h。
木糖赖氨酸脱氧胆盐XLD:产生硫化氢,黑色中心周边无色。
HE琼脂:分解乳糖为黄色,不分解乳糖为蓝绿色或蓝色。
4 生化试验及初步血清学鉴定
4.1 初步鉴定
平板上挑取2~5个典型或可疑菌落,分别接种三糖铁TSI(表面划s,内部穿刺)和赖氨酸脱羧酶,36℃±1℃培养18~24h,必要时延长到48小时。
4.2生化试验
初步鉴定的同一批菌落,接种尿素琼脂pH7.2和胰蛋白胨水(靛基质)、氰化钾培养基,36℃±1℃培养18~24h,必要时延长到48小时。
反应序号A1:硫化氢阳性,靛基质阴性,尿素琼脂阴性,氰化钾阴性,赖氨酸脱羧酶阳性为典型反应,判定为沙门氏菌属。尿素、氰化钾、赖氨酸脱羧基三项中有两项异常,为非沙门氏菌。
反应序号A2:硫化氢阳性,靛基质阳性,尿素琼脂阴性,氰化钾阴性,赖氨酸脱羧酶阳性,需补做甘露醇和山梨醇试验。沙门氏菌靛基质阳性变体两项都是阳性,但需要结合血清学鉴定结果进行判定。
反应序号A3:硫化氢阴性,靛基质阴性,尿素琼脂阴性,氰化钾阴性,赖氨酸脱羧酶多数阳性,少数阴性,补做ONPG,阴性为沙门氏菌,赖氨酸脱羧酶基本阳性,只有甲型副伤寒沙门阴性。
4.3 自动鉴定方法
根据初步鉴定结果,从营养琼脂平板上挑取可疑菌落,用生理盐水制备成浓度适当的菌悬液,使用API20E生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物鉴定系统进行鉴定。
5 A-F多价诊断血清凝集试验
当图片染色和生化反应都疑为沙门氏时,应用沙门氏属A-F群多价O诊断血清进行凝集试验,同时用生理盐水作对照。
5.1 抗原准备
1.2%~1.5%琼脂培养物作为玻片凝集试验的抗原。
O血清不凝集时,将菌株接种在2%~3%琼脂培养基上再检查,挑取菌苔于1ml生理盐水中做成浓菌液,酒精灯火焰上煮沸后在检查。检查是否Vi抗原作用。
H抗原发育不良时,将菌株接种在0.55%~0.65%半固体琼脂平板中央,菌落蔓延生长时,在其边缘部分取菌检查,或将菌株通过装有0.3%~0.4%半固体琼脂的小玻管1~2次,自远端取菌培养后在检查。
5.2 多价菌体抗原O鉴定
在玻片上划出两个约1cm×2cm区域,挑取1环待测菌,各放1/2环于玻片上的每一个区域上部,在其中一个区域下部加入一滴生理盐水,作为对照。再用无菌接种环或针分别将两个区域菌落研成乳状液。将玻片倾斜,摇动混合1分钟,并对着黑暗背景观察,任何程度的凝集现象皆为阳性反应。
5.3 多价鞭毛抗原H鉴定
与菌体抗原类同。
6、检查结果
综合生化试验和A-F多价诊断血清凝集结果,报告:25g(ml)样品检出或未检出沙门氏菌,必要时将菌株送至专业检验检疫部门进一步血清学鉴定。