1、培养基煮沸溶解后再高压灭菌，还是直接高压灭菌存在疑惑。

拿麦康凯琼脂举个例子，溶解后灭菌，平板上没有不溶的结晶紫，没有紫色的斑点；相对比未溶解灭菌的，平板上有结晶紫和紫色的斑点。所以正确的做法是先煮沸溶解后再高压灭菌。

2、培养基PH值为什么不在标准范围内？

其实出现这个情况的问题有很多种，大致我分为这么6大点：

①质量不好（生产厂家出厂时pH就不正确）；

②灭菌问题（高压灭菌温度过高或灭菌时间过长，导致葡萄糖类焦化从而pH降低）；

③保存时间（超过保质期或结块）；

④水质出现问题（可以用去离子水、纯化水、蒸馏水不能用矿泉水、自来水）；

⑤保存温度（保存温度过高）；

⑥光线直射总结本人认为以上6点都可能导致培养基pH出现偏差，如果出现此类问题，建议逐一排查，直到问题解决。

3、培养基高压灭菌时为什么会焦化？

不少检验人员在实验时，发现经过灭菌的培养基有焦化现象，我认为引起此现象的主要原因有以下4点：

①可能你灭菌的时候温度超过了121℃（正常115-116℃20min即可）；

②灭菌时间过长；

③培养基在容器中装的太多（不要超过容器容量的80%）；

④灭完菌的培养基在高温环境中保存的时间过长，这些都会导致培养基发生焦化现象。

4、培养基PH怎么测定？

通常分两种情况：

①对于无需高压灭菌的培养基，先煮沸溶解后再冷却至25℃时，测定其pH值（固体培养基至少测2个点，取其平均值）；

②对于需要高压灭菌的培养基，高压灭菌后，冷却至25℃测其pH（固体培养基至少测2个点，取其平均值）。

5、含琼脂培养基在倒平板为什么有时候不凝固或凝固不好？

针对以上情况，我做了分析：

①针对需要高压灭菌的培养基，倒平板时候要先摇匀（因为琼脂分子量比较大，在冷却过程中容易沉淀到底部，导致琼脂分散不均匀）；

②针对无需高压灭菌的培养基，一次煮沸溶解后不能直接倒平板，应重复煮沸溶解3-5次（因为一次不能确保琼脂完全溶解）。

6、为什么同一品牌的不同批号，粉末颜色有差别？

分析可能有3个原因：

①此培养基成分含有染料或指示剂；

②不同批次粉末培养基含水量不同，一般要求≤6%，含水量越高，颜色越深；

③加工时球磨时间越长颜色越深。

此次分享，主要是对微生物培养基使用这块会遇到的常见问题进行简单分析，希望通过短短几行字，能够帮助广大在实验中出现过此类问题的同仁，其中若有不对的地方忘诸位指正，谢谢！