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▲CNAS-CL09-2013《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》
常用标准菌种来源
美国菌种保藏中心ATCC
英国国家典型菌株保藏中心NCTC
中国医学细菌保藏管理中心CMCC
中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC
▲ ATCC和CICC标准菌种的常见包装形式
接下来一起了解下标准菌株的活化方法
ATCC标准菌种KWIK-STIKTM产品的活化说明
将KWIK-STIKTM产品平衡至室温，撕开袋子。取出菌种管，揭下标签上可撕取部分，贴于原始培养皿或QC记录本上。捏碎管帽处的安瓿，使其释放出液体，将管子直立以使液体流入管底。挤压管底的菌球，使之与液体混合，以形成均匀的菌悬液。将棉签浸于菌悬液中，并于培养皿约三分之一范围内轻轻挤压并旋转涂抹。使用无菌接种环进行三区或四区划线，以尽可能分离出单菌落。随即在适合的温度和条件下倒置培养已接种的原始培养皿。按照适宜的生物危害品处置方法（如121℃高压30 min），丢弃菌种管。
详情请参阅北京陆桥官方网站资料下载区标准菌种活化官方说明
▲ ATCC标准菌株KWIK-STIKTM产品操作说明
CICC标准菌种的操作说明
使用酒精棉球擦拭冻干菌种管表面进行消毒。将冻干管顶端置于酒精灯火焰上均匀加热约1~2分钟。立即滴2~3滴无菌水于加热部位，使管壁破裂。使用镊子或剪刀敲击裂痕处，将管顶端敲落。吸取约0.5mL液体培养基于冻干管中，将冻干菌粉充分溶解。取0.2mL菌悬液转移至装有5mL~8mL液体培养基的试管中混匀，并取0.1mL菌悬液转移至平板培养基上，进行划线分离。将液体培养基和平板培养基置于合适条件下培养。按照适宜的生物危害品处置方法（如121℃高压30 min），丢弃菌种管。
注：也可使用砂轮在冻干管顶端打磨出裂痕，再使用镊子或剪刀将管顶端敲落。
▲ CICC标准菌株的打管方式
菌株活化用培养基的选择
标准菌株的活化需使用非选择性（不含任何抑菌成分），且营养富集的培养基，固体培养基和液体培养基建议同时使用，固体培养基上更易观察到菌种的形态、纯度，液体培养基更利于菌种的复苏和增殖，在特定条件下培养以优化菌株的生长和回收，常见菌种活化培养基见表1和表2。
表1常见菌种活化推荐使用固体培养基
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菌种类别 |
菌种举例 |
培养基和货号 |
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普通细菌 |
金黄色葡萄球菌 |
胰蛋白胨大豆琼脂 GCM168 |
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对营养要求较高的细菌 |
化脓链球菌 |
羊血琼脂平板PB001 |
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嗜盐性弧菌 |
副溶血性弧菌 |
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂 CM409 |
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霉菌和酵母菌 |
黑曲霉 酿酒酵母 |
沙氏葡萄糖琼脂CM145 |
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乳酸菌 |
嗜热链球菌 婴儿双歧杆菌 |
MRS琼脂GCM188 |
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维生素测定用菌株 |
鼠李糖乳杆菌 |
乳酸杆菌琼脂CM1401 |
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梭菌属 |
产气荚膜梭菌 |
羊血琼脂平板PB001 |
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弯曲菌 |
空肠弯曲菌 |
巧克力平板PB002A 哥伦比亚血琼脂平板 PB003A |
表2常见菌种活化推荐使用液体培养基
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菌种类别 |
菌种举例 |
培养基和货号 |
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普通（对营养要求较高）细菌 |
金黄色葡萄球菌 化脓链球菌 |
脑心浸出液肉汤 GCM917B |
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嗜盐性弧菌 |
副溶血性弧菌 |
3%氯化钠脑心浸出液肉汤 GCM917B+3%NaCl |
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霉菌和酵母菌 |
黑曲霉 酿酒酵母 |
沙氏葡萄糖肉汤CM154 |
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乳酸菌 |
嗜热链球菌 婴儿双歧杆菌 |
MRS肉汤CM187 |
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维生素测定用菌株 |
鼠李糖乳杆菌 |
乳酸杆菌肉汤CM1402 |
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梭菌属 |
产气荚膜梭菌 |
庖肉培养基 CM605+CM607 |
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弯曲菌 |
空肠弯曲菌 |
Bolton肉汤CM182 +裂解脱纤维羊血+FBP浓原液 |
微生物培养温度
绝大多数微生物为嗜中温，推荐培养温度为36℃±1℃；
嗜冷菌（如小肠结肠炎耶尔森氏菌、荧光假单胞菌等）推荐培养温度25℃~30℃；
嗜热菌（如嗜热脂肪芽孢杆菌）推荐培养温度55℃~65℃。
微生物氧气条件
绝大多数微生物为兼性厌氧菌，正常环境培养；
厌氧菌（如双歧杆菌属、梭菌属）需在厌氧环境下培养；
微需氧菌（如弯曲杆菌属）需在微需氧环境下培养。
厌氧和微需氧培养需要配备培养罐、厌氧（或微需氧）产气袋和氧气指示剂。厌氧（或微需氧）产气袋为一次性产品，培养罐开启后需更换产气袋。陆桥代理进口品牌三菱瓦斯、OXOID和BD产品。
▲ 日本三菱产气袋和培养罐
培养时间
将菌液接种到平板和肉汤中，在合适的温度和氧气条件下培养，一般细菌需要培养24h~48h，霉菌培养3d~5d。
生物安全
实验室的生物安全防护级别应与其拟从事的试验活动相适应。
沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌等第三类病原微生物，必须在二级生物安全柜中操作，确保生物安全！
