1.6菌种保存
所有菌种均由实验室专人(双人双锁)保存于专用冰箱或其它保存方式。要建立菌种登记台帐,详细记录菌种采集、保管、制备、使用、处置情况;每一种菌种一定要有检测鉴定报告(具体的的鉴定方法见菌种质量报告鉴定证书上的方法);
具体菌种保存方法一般为:
将复苏后肉汤与灭菌甘油按15%甘油比例(肉汤8.5mL+甘油1.5mL)混合,-30 ℃冻存,(可用2mL冻存管冻存多管),作为保藏储备菌株F1代,也可使用商品化的菌种保存管。
1.7菌种的传代
1.7.1标准菌株的复苏:
① 菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染。
② 每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。
1.7.2标准储备菌株每转接一次须进行确认。(确认方法一般为他们各自独有的形态,在鉴别培养基上的形态)
1.7.3工作菌株转接的方法:
①、配制营养琼脂培养基(溶血性弧菌加3%氯化钠 ),121℃高压灭菌15分钟后分装在试管内,冷却后备用。
②、在无菌条件下,用接种环挑取菌苔至新鲜试管上作“米”字形划线接种,放置在36℃的培养箱内培养24小时。
1.7.4工作菌株的使用
1.7.4.1内部质量控制:一个月一次阳性对照、培养基每批验收;
1.7.4.2外部质量控制:能力验证、实验室比对;
1.7.5工作菌株的期间核查
1.7.5.1期间核查的频率:每半年对使用标准菌株进行一次期间核查。
1.7.5.2工作菌株期间核查的方法及依据:同工作菌株的确认一样。
1.7.5.3建立标准菌株期间核查记录。
1.8菌种的标识和使用期限:
1.8.1标识:菌种代数的计算为干粉菌种为第0代,转接一次加一代。具体标识为:例单增李斯特氏菌第0代,标识为DZ-0,第一代标识为DZ-01第一代有12支,则DZ-01-01、……、DZ-01-12;并标明日期:如2016.02.13这样填写。
1.9 菌种的保藏
1.9.1将试管内菌种放入冰箱中2~8℃冷藏保存。
1.9.2将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中2~8℃保存。每支保存菌种需标明菌名、标准编号、传次、传代日期。
1.10菌种的销毁
1.10.1菌种使用后或超过贮存期的应进行销毁。
1.10.2需销毁的菌种,应用高压蒸汽(121℃)灭菌30分钟。
1.10.3灭菌后,再进行清洗和处理。
1.10.4销毁的菌种应做好记录。销毁时由化验负责人监督销毁,保管人员负责销毁。