1.目的

规范无菌室的使用管理，保持无菌室的卫生环境，保证微生物检测结果的准确性。

2.适用范围

适用于实验室无菌室的使用和管理。

3.职责

3.1实验室检验员负责无菌室的日常使用、维护。

3.2实验室领班负责无菌室的管理。

3.3部长负责对无菌室管理情况进行监督检查。

4.内容及要求

4.1准备工作

4.1.1 无菌室的准备

4.1.1.1 无菌室应设有无菌操作间、缓冲间和更衣室，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。

4.1.1.2 无菌室经常保持清洁，每次使用前用紫外灯照射或臭氧消毒30分钟以上方可使用，并且同时打开超净台进行吹风。

4.1.1.3 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如75%酒精、0.1%的新洁尔灭溶液等。

4.1.1.4 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

4.1.1.5 无菌室要求最大限度保持无菌状态，禁止在无菌室以内从事与微生物检测操作无关的活动。

4.1.2 着装准备

4.1.2.1无菌室用工作服、帽、鞋、口罩用前必须经过紫外灯或臭氧消毒，无菌室的工作服应经常清洗，保持整洁。

4.1.2.2进入无菌室要穿专用无菌工作服、帽、鞋、口罩，不准将无菌室的工作服、鞋、帽穿出室外。

4.1.3操作人员准备

操作人员在进行无菌操作前，双手必须进行洗手消毒（75%酒精、0.1%新洁尔灭溶液等）。非操作人员严禁进入无菌室。

4.2 操作要求

4.2.1 需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

4.2.2 待检样品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。

4.2.3 进入无菌室后，随手关好门，操作过程中严禁人员出入。

4.2.4 无菌操作应在超净台上进行，每次操作过程中，均应做空白对照试验样，以检查无菌操作的可靠性。检测过程严格按照检测规程进行，确保检测结果准确无误。

4.2.5 仪器、器械、平皿等物品需从传递窗口传入无菌室。

4.2.6 如有菌液或样品洒在超净台上，应立即用75%的酒精棉球擦拭干净，在消毒处理。

4.2.7 灭菌后物品放在指定位置，注明灭菌日期，高压灭菌物品可存放3天，过期不能再用，需重新包装灭菌。

4.3 清洗要求

4.3.1 带有菌液的吸管、试管、培养皿等器皿应浸泡在盛有0.1%新洁尔灭溶液或其它消毒溶液的消毒桶内消毒。

4.3.2 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

4.3.3 操作完毕，台内物品全部取出并用消毒液喷洒消毒，用后的物品归位，垃圾带出无菌室，再用紫外灯辐照20分钟。

4.4无菌室的清洁消毒

4.4.1 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

4.4.2 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取无菌培养皿分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露15分钟后，倒置于36℃培养箱培养48小时，取出检查。100级超净台平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级无菌操作间平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

4.4.3 除每日进行清洁和使用前的杀菌之外，要根据空白样的检测情况，及时对无菌室进行彻底的熏蒸或消毒。