1.细胞收集:悬浮细胞直接收集10ml的离心管中,而帖壁细胞先用滴管轻轻吹打,调亡细胞一经吹打可能脱壁,收集到10ml的离心管中,没脱壁的细胞用0.02%的EDTA消化使之脱壁,每样本细胞数为(1~5)×106,500~1000r/min离心5min弃去培养液。
2.用孵育缓冲液洗1次,500~1000r/min离心5min。
3.用100μl的标记溶液重悬细胞,室温下避光孵育10~15min。
4.500~1000r/min离心5min沉淀细胞,孵育缓冲液洗1次。
5.加入荧光溶液4℃下孵育20min,避光并不时振动。