食品伙伴网服务号
 
当前位置: 首页 » 食品专题 » 生物实验技术 » 免疫性技术 » 正文

碘同位素标记单克隆抗体

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-27

同位素标记是一种重要的抗体标记技术,牨977Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外,还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。

  () 原理

  氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将I2氧化为I+并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的McAb仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。

  () 方法

      在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg100μl
      再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液
      再加入10μl(1mCi)125I

          ↓

     加入10μl氯胺-T(5mgml溶于0.05M磷酸盐缓冲液),孵育时间不超过30

             ↓

      加入100μl偏重亚硫酸钠(1.2mgml溶于0.05M磷酸缓冲液)

             ↓

      加入200μl KI溶液(少许结晶KI溶于0.05M磷酸缓冲液+4%牛血清白蛋白)

             ↓

      用PD10(Sephadex G25)除去游离125I
      用4BSA PBS洗脱

             ↓

      分部收集,0.5ml/管

  每管取5μl进行γ计数,计算标记抗体的比活性和标记率

           结合于McAb125I放射性强度(cpm)
    标记率()=───────────────────
              总放射性强度(cpm)

                结合于某一管McAb上的放射性强度
    比活性(μCi/μgMcAb)=────────────────
                    某一管McAb总量

  () 试剂器材

  1. 纯化后的McAb

  2. 0.05M磷酸缓冲液,氯胺桾,偏重亚硫酸钠,KIBSA

  3. 125I

  4. 有通风装置的超净台,γ计数仪

  5. PD10(Sephadex G25)

  () 注意事项

  1. 严防同位素污染,工作人员必须穿着工作衣,戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用125I和标记物应妥善保管。

  2. 如标记细胞因子、激素等,应选用更温和的标记方法,使保持更好的生物学活性。

 

 
[ 网刊订阅 ]  [ 食品专题搜索 ]  [ ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 关闭窗口 ] [ 返回顶部 ]

 

 
推荐图文
推荐食品专题
点击排行
 
 
Processed in 0.375 second(s), 18 queries, Memory 0.93 M