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免疫中和反应技术(Neutralization test technique):固定血清稀

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-27

病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于:从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;测定抗病毒血清或抗毒素效价;新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。

本法多将病毒作10倍递增稀释,分置2列试管,第一列加正常血清(对照组),第二列加待检血清(试验组)。混合后,置37作用1h,将各管混合液分别接种选定的试验动物,每一稀释度用35只动物。接种后,逐日观察,并记录其死亡数,观察结束后,计算LD50和中和指数,本法适用于大量检样的检测。

表 固定血清稀释病毒法术式

混合前

病毒稀释

2×10-1

2×10-2

2×10-3

2×10-4

2×10-5

2×10-6

2×10-7

-

正常

血清

稀释病毒

-

-

-

1.0

1.0

1.0

1.0

-

正常血清

-

-

-

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

对照组

稀释液

-

-

-

-

-

-

-

1.0

待检血清

稀释病毒

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

-

待检血清

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

中和组

稀释液

-

-

-

-

-

-

-

1.0

混合后病

毒稀释

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

10-6

10-7

-

表 固定血清稀释病毒法中和试验(例)

病毒稀释

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

10-6

10-7

LD502

中和指数

正常血清对照组

-

-

-

441

34

14

04

10-5.5

103.31.995

待检血清中和组

44

24

14

04

04

04

04

10-2.2

注:[1]分母为接种数,分子为死亡数;

2LD50计算见实例。

中和指数=中和组LD50/对照组LD50=10-2.2/10-5.5=103.3

3.3反对数是1.995,故中和指数103.31.995。也就是说该待检血清中和病毒的能力为正常血清的1.995倍。本法多用以检出待检血清中的中和抗体,对病毒而言,通常中和指数大于50者判为阳性,1049为可疑,小于10为阴性。

 

 
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