病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于:①从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;③测定抗病毒血清或抗毒素效价;④新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。
本法多将病毒作10倍递增稀释,分置2列试管,第一列加正常血清(对照组),第二列加待检血清(试验组)。混合后,置
表 固定血清稀释病毒法术式
混合前 病毒稀释 |
2×10-1 |
2×10-2 |
2×10-3 |
2×10-4 |
2×10-5 |
2×10-6 |
2×10-7 |
- |
|
正常 血清 |
稀释病毒 |
- |
- |
- |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
- |
正常血清 |
- |
- |
- |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
|
对照组 |
稀释液 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
1.0 |
待检血清 |
稀释病毒 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
- |
待检血清 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
|
中和组 |
稀释液 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
1.0 |
混合后病 毒稀释 |
10-1 |
10-2 |
10-3 |
10-4 |
10-5 |
10-6 |
10-7 |
- |
表 固定血清稀释病毒法中和试验(例)
病毒稀释 |
10-1 |
10-2 |
10-3 |
10-4 |
10-5 |
10-6 |
10-7 |
LD50[2] |
中和指数 |
正常血清对照组 |
- |
- |
- |
4/4[1] |
3/4 |
1/4 |
0/4 |
10-5.5 |
103.3=1.995 |
待检血清中和组 |
4/4 |
2/4 |
1/4 |
0/4 |
0/4 |
0/4 |
0/4 |
10-2.2 |
注:[1]分母为接种数,分子为死亡数;
[2]LD50计算见实例。
中和指数=中和组LD50/对照组LD50=10-2.2/10-5.5=103.3
查3.3反对数是1.995,故中和指数103.3=1.995。也就是说该待检血清中和病毒的能力为正常血清的1.995倍。本法多用以检出待检血清中的中和抗体,对病毒而言,通常中和指数大于50者判为阳性,10~49为可疑,小于10为阴性。