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免疫中和反应技术(Neutralization test technique):空斑减少法

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-27

病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于:从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;测定抗病毒血清或抗毒素效价;新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。

在细胞培养上进行病毒中和试验,近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度,使每0.2ml80个~100PFU(空斑形成单位),与不同稀释度的待检血清等量混合,置37作用1h2h,分别测定PFU,使空斑减少50%血清稀释度即为该血清的中和价。

表 空斑减少法中和试验示例

血清稀

释倍数[1]

1:16

(4-2)

1:64

(4-3)

1:256

(4-4)

1:1024

(4-5)

1:409

(4-6)

不加

血清

对照

中和抗

体价[2]

待检血清A

空斑数

3

13

38

51

53

55

4-3.6=1:140

空斑减少率

95

76

31

7

0

待检血清B

空斑数

8

25

51

56

55

4-4.1=1:290

空斑减率数

85

54

7

0

待检血清C

空斑数

6

22

44

55

4-5.2=1:1300

空斑减少率

89

59

19

注:[1] 血清用4倍递增稀释;

[2] 空斑减少50%的血清稀释度,其计算法同LD50的计算。

 
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