原理
应用荧光素标记的抗体或抗原进行免疫沉淀反应,然后置于荧光显微镜下观察。此法有利于微量可溶性抗原的检查和鉴定。
材料与试剂配制
1.荧光素标记抗体(或抗原)
2.待测可溶性抗原(或抗体)
3.醋酸纤维膜(10cm×2.5cm)
4.0.05Mol/L pH8.2巴比妥缓冲液
5.洗涤液 pH10.0的巴比妥缓冲液。
6.液体石蜡
操作方法
1.取5μl待测抗原进行膜电泳(见醋酸纤维膜电泳一节)电压6V/cm~10V/cm,电流0.4mA/cm,电泳2h。
2.取下膜放入湿盒内,沿抗体槽的位置放一条含标记抗体滤纸条(约10μl),在室温中孵育过夜。
3.去掉抗体纸条,将膜浸在洗涤液中1h。
4.流水中冲洗10min,置室温干燥。
5.干后浸入液体石蜡中使其透明10min。
6.用荧光显微镜观察荧光弧。