酶标抗体的鉴定

1．酶标抗体的活性鉴定 一般以琼脂扩散和免疫电泳进行鉴定。使酶标抗体和相应的抗原(抗原浓度为1mg/ml)产生沉淀线,洗涤后于底物溶液中显色,显色后用生理盐水漂洗,沉淀线不褪色,说明酶和抗体都具有活性。良好的酶标结合物琼脂扩散滴度一般应在1：16以上。

2．酶结合物的定量测定 包括酶量、IgG含量、酶与IgG克分子比值以及结合率的测定。

酶量(µg/ml)=OD_403nm×0.42

（1）戊二醛法：IgG(mg/ml)=(OD_280nm－OD_403nm×0.42)×0.94×0.62

(OD₄₀₃×0.42为酶在403nm的光密度，抗体与酶－戊二醛结合后OD_280nm约增加6%，所以乘以0.94校正。由于兔IgGOD_280nm=1.0时为0.62mg，所以又乘以0.62)。

（2）过碘酸钠法：IgG(mg/ml)=(OD₂₈₀－OD₄₀₃×0.30)×0.62

(3)克分子比值=(酶ug/m) /40000/[(IgG mg/ml) / 160 000]=酶X4 /IgG

(40 000和160 000分别为辣根过氧化物酶和IgG的分子量)。

⑷ 酶结合率=结合物中的酶量/标记时加入的酶量×100%。

⑸ 酶标记率：OD_403nm/OD_280nm即酶中正铁血红素辅基的吸光度(403nm)与抗体－酶蛋白中的色氨酸、酪氨酸的吸光度(280nm)之比表示HRP在Ab^E中所占的比例，它与E/Ab克分子比值呈高度正相关。

3．酶结合物的质量标准 纯化的酶结合物的质量标准应包括以下几个方面。

（1）酶的催化活性。

（2）免疫学活性。

（3）未联接的游离酶的量。

（4）未联接的原始免疫反应物的量。

（5）每个酶分子所联接的免疫反应物分子数目。

（6）生化性质。

（7）酶标记免疫试验效果。

酶结合物的质量差异,可引起试验敏感度的很大变化。例如用不同的程序制得的HRP－IgG结合物进行酶标记免疫试验，可得到不同的试验结果，故应予重视。

用于ELISA酶标抗体的各项指标参数