铁粉吸附法
1.材料及试剂
(1)铁粉或羰基铁粉(Atomergic chemetals)99%的纯度,颗粒小于60µm(Goodfellow Metals)。
(2)强磁铁(马蹄形)。
(3)一块小棒状磁铁(约1cm长)。
(4)毛细吸管等。
2.操作方法
(1)称取一定量的铁粉,一般为10g,用100ml生理盐水洗涤4次,去除任何可溶性有毒物质。在倒去盐水时,用强磁铁吸住铁粉。
(2)用50ml生理盐水混悬铁粉。摇匀后,分装于10个瓶中,包扎瓶口,121℃灭菌20min,拿出后立即轻轻摇匀,防止铁粉结块,储藏备用。
(3)临用前,倒去瓶中的生理盐水,加入适量的单个核细胞悬液(3ml~5ml,细胞总数为8×107个/瓶)。37℃温育45min,中间不时晃动,使铁粉悬浮起来。
(4)加入一块小磁铁棒于瓶中,让其吸住铁粉以及附着在铁粉上的细胞。
(5)倒出悬液,此悬液主要是淋巴细胞,离心,收集。
(6)在铁粉瓶内倒入一定量的Hank’s液,用力振摇后,以强磁铁吸附,几分钟后,倒出液体。
(7)2 000r/min离心液体,管底即为单核细胞。
玻璃板吸附法
将分离的单个核细胞倾于无菌洁净的玻璃平皿内,置37℃ 30 min~40min,用毛细吸管轻轻吸取悬液,即为淋巴细胞。用适量的Hank’s液冲洗平皿,收获即为单核细胞悬液。