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贮存液 |
贮存温度 |
反应浓度 |
反应缓冲液 |
温度 |
预处理 |
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0.01mol/l tris(ph7.8) |
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链霉蛋白酶a |
20mg/ml |
-20℃（溶于水） |
1mg/ml |
0.01mol/l edta |
37℃ |
自消化b |
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0.5% sds |
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0.01mol/l tris(ph7.8) |
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蛋白酶kc |
20mg/ml |
-20℃（溶于水） |
50μg/ml |
0.005mol/l edta |
37～56℃ |
无须预处理 |
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0.5% sds |
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a：链霉蛋白酶是从链球菌（streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除dna酶和rna酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l tris·hcl(ph7.5)、10mmol/l nacl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。
c：蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。该酶有两个ca2 结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2 ，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2 的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l ca2 而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入egt（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2 。
