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琼脂糖凝胶电泳

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-07-01

  1.用蒸馏水将电泳槽和梳子冲洗干净.放在水平桌面上,并架好梳子.

  2.根据核酸分子量的大小配制不同浓度的琼脂糖凝胶,一般200~400bp的DNA片段, 可配制1.2~1.7%浓度的琼脂糖用于电泳.

  3.配制0.5XTBE电泳缓冲液100ml于三角烧瓶中,称取一定量的琼脂糖粉放入后沸水锅 或微波炉内加热熔化.冷却至60℃(需要时可加入溴乙锭),倒入电泳槽中,待凝固.

  4.向电泳槽中倒入0.5XTBE,其量以没过胶面2mm为宜,小心移去梳子.如样品孔内有 气泡,应设法除去.

  5.在DNA样品中加入0.2体积的载样缓冲液,混匀后,加入样品孔内.

  6.接通电源,一般红色为正极黑色为负极,切记DNA样品由负极往正极泳动(靠近加样 孔的一端为负).电压为1-5V/cm(长度以两个电极之间的距离计算).

  7.根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳.一般200~400bp的PCR产物50V电压, 电泳20~40min即可.

  8.溴化乙锭染色后,紫外仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子量标准比较被扩 增产物的大小.


 
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