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异硫氰酸胍法

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-07-01

  异硫氰酸胍法提取制备模板核酸此法主要用于RNA的提取.标本为组织细胞及血清等.

  1.异硫氰酸胍消化液

  异硫氰酸胍4mol/L
  柠檬酸钠(PH7.0)25mmol/L
  十二烷基肌酸钠0.5%
  β-巯基乙醇0.1mol/L

  2.消化方法:用50~100ul细胞悬液及血清,加等体积的异硫氰酸胍消化液振混匀 后,或65℃1小时,或室温放置数分钟,然后加1/10体积的3mmol/L pH5.2的醋酸钠缓 冲液,再加等体积的酚:氯仿,用力振摇约10s,10000r/min,离心5min,取上清加等 体积异丙醇-20℃放置3h后,14000r/min离心15min,沉定用75%冰冷乙醇离心洗涤1~ 2次,真空干燥,沉淀用TE缓冲液溶解即可用于逆转录PCR扩增,或放-20℃保存.

 
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