体外转录合成siRNAs，其成本相对化学合成法比较低，是一种相对性价比高的筛选siRNAs的好方法，而且要比化学合成法更快的得到siRNAs。一旦得到DNA 双链模版（这个还是需要DNA合成的，不过DNA合成的成本就比较低了），只要24小时转染，不需要等很久。在体外构建双链RNA时，分别在体外转录出正义和反义RNA，再将两者退火，形成双链RNA。体外合成的双链RNA可以用脂质体转入细胞中。但有些细胞脂质体转移效果差，转移到细胞内的双链RNA半衰期短。
这个方法的不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和数量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的时间——化学合成只需要定购就可以了。但体外转录得到的siRNAs只要较低的浓度就可以达到化学合成siRNAs较高浓度得到的效果。
适用：筛选siRNAs，特别是需要制备多种siRNAs，试验经费受限时。
不适用：1.需要大量的某个特定的siRNA。2.进行长期研究。
