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SSCP原理

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-07-01
  单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象,这种立体结构主要是由 其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的,当有一个碱基发生改变时,会或多或 少地影响其空间构象,使构象发生改变,空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰 胺凝胶中受排阻大小不同.因此,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),可以非常 敏锐地将构象上有差异的分子分离开.作者称该方法为单链构象多态性 (Single-Strand Conformation Polymorphism,SSCP)分析.在
PCR-SSCP技术,进一步提高了检测突变方法的简便性和灵敏性.其基本过程是:①PCR扩增靶DNA;②将特异的PCR扩增 产物变性,而后快速复性,使之成为具有一定空间结构的单链DNA分子;③将适量的单 链DNA进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;④最后通过放射性自显影、银染或溴化乙锭显 色分析结果.若发现单链DNA带迁移率与正常对照的相比发生改变,就可以判定该链构 象发生改变,进而推断该DNA片段中有碱基突变.
该方法简便、快速、灵敏,不需要特 殊的仪器,适合临床实验的需要.但它也有不足之处.例如,只能作为一种突变检测方 法,要最后确定突变的位置和类型,还需进一步测序;电泳条件要求较严格;另外,由 于SSCP是依据点突变引起单链DNA分子立体构象的改变来实现电泳分离的,这样就可 能会出现当某些位置的点突变对单链DNA分子立体构象的改变不起作用或作用很小 时,再加上其他条件的影响,使聚丙烯酰胺凝胶电泳无法分辨造成漏检.
尽管如此,该方法和其他方法相比仍有较高的检测率.首先,它可以发现靶DNA片段中未知位置的碱 基突变.Takao,经实验证明小于300bp的DNA片段中的单碱基突变,90%可被SSCP发 现,他认为现在知道的所有单碱基改变绝大多数可用该方法检测出来.另外,SSCP方 法可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同迁移率的突变单链DNA分离,并且还可以进一步 提纯.用这种方法可以最终从DNA序列水平上鉴别突变DNA片段.
 
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