质粒DNA的大量制备

    （1）将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。
　　（2）将1ml含菌液倒入含相应抗生素的Lb 100ml中，37℃振荡培养至A590=1.0(5～6h)。
　　（3）加氯霉素（170μg/ml）扩增，37℃温箱中培养过夜。
　　（4）收集菌液于离心管中，冰浴10min。3000rpm,离心10min，去上清。
　　（5）加溶液Ⅰ5ml悬浮菌体，将悬液倒入高速离心管中，摇匀，冰浴5min。
　　（6）加溶液Ⅱ10ml轻轻混匀，室温下5min。
　　（7）加溶液Ⅲ7.5ml轻轻混匀，冰浴30min。15000rpm，4℃离心20min。
　　（8）取上清液于高速离心管中，加2倍体积的无水乙醇，混匀，入-20℃3～5h。
　　（9）15000rpm 4℃ 离心20min。
　　（10）弃上清，将离心管倒放入真空泵中抽干（10～15min）。
　　（11）用5ml1×TE溶解，加入RNase A 15～20μl，42℃水浴4h于过夜。
　　（12）加入5ml饱和酚，混匀，4000～5000rpm离心5min，取上清液入5ml离心管内。
　　（13）分别加入2.5ml饱和酚，2.5ml氯仿，混匀后同样离心收集上清。
　　（14）加等体积氯仿/异戊醇（24：1）混匀，同样离心收集上清。
　　（15）加入1/10体积的3mol/l NaAc及2倍体积的无水乙醇于-20℃3～5h。
　　（16）10000rpm 4℃离心20min。
　　（17）弃上清，加入75%乙醇洗涤2次。
　　（18）离心弃上清，真空抽干，加入适量1×TE溶解质粒DNA。