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质粒DNA的羟基突变

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-07-06

1.临用之前制备羟胺溶液,置冰上待用。

2.将用氯化铯纯化的10μg质粒DNA加到含500μl羟胺溶液的微型离心管。

3.在37℃下培养20小时。

4.加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白(BSA)和1ml无水乙醇终止反应,置-70℃沉淀DNA10分钟。

5.离心10分钟,小心弃去所有上清液,收集DNA。

6.将DNA悬浮于100μl TE缓冲液(pH8)中,再加入10μl 3mol/L的醋酸钠和250μl的无水乙醇,在-70℃下放置10分钟,重复步骤5,收集DNA。

7.让沉淀自然干燥,再悬浮于100μl TE缓冲液(pH8)。

8.该DNA可直接用于大肠杆菌或酵母的转化。诱变DNA与非诱变DNA相比,酵母的转化频率相对降低约3倍。在大肠杆菌中,Ura-质粒可被检出。


 
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