siRNA制备方法比较

比较项目

化学合成

体外转录

RNase III降解dsRNA

siRNA
表达载体

PCR
表达框

材料需求

21-mer RNA
oligos(一对)

29-mer DNA oligos(一对)

转录模版 (200-1000bp，两侧带T7 启动子)

55-60-mer DNA oligos(一对)

~50-mer DNA oligos(一对)

全部制备/合成时间所需时间

4天—2周

24 小时 DNA oligo合成时间

1 天 转录模版制备时间

5天以上 DNA oligo合成时间

~ 6 小时 DNA oligo合成时间

个人所需操作时间

几乎不需要*

中等

中等

多

中等

是否需要验证和寻找最有效siRNA

需要

需要

不需要

需要

需要

能否标记siRNA (例如用于荧光显微镜分析siRNA进入细胞过程或者在细胞中的定位）

能

能

能

不能

不能

转染的相对难易程度

好

好

好

差

差

可筛选性 (例如抗生素筛选)

不可以

不可以

不可以

可以

不可以

能否用于长效抑制

不可以

不可以

不可以

可以（抗生素筛选）

不可以

能否大规模制备

可以

有限

有限

可以

有限

检测总体转染效率

不可以

不可以

不可以

可以

不可以

每个基因的相对费用（不包含人力）

高

中等

低

中等

中等

*取决于合成后是否包含纯化、去保护，以及厂家提供的是已经退火的即用型双链还是冻干的单链