外显子扩增

外显子扩增(exon amplification) 是以RNA剪接为基础的快速而有效地克隆外显子的方法。所用的载体pSPLl的结构特点是外源片段的克隆位点处在一个内含子序列中，内含子序列的两侧是人免疫缺陷病毒I(HIVl)tat基因的5’剪接位点和3，剪接位点。在剪接位点两侧的序列中含有兔珠蛋白基因的间隔序列2(1VS2)。将待检的DNA片段插入载体所携带的内含子序列中，然后用来转染猴肾细胞系COS-7细胞。在细胞内转录产生RNA时，如插入片段中有外显子序列，则该外显子的剪接位点将同载体上的tat基因内含子的剪接位点配对，于是在成熟的mRNA分子中就包含了待鉴定的外显子。然后用反转录PCR方法将mRNA反转录成cDNA后再加以扩增。最后可把待鉴定的外显子分离出来，进一步克隆基因。