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对照组的总RNA提取 mRNA完整性鉴定 |
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实验组的总RNA提取 mRNA完整性鉴定 |
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锚定引物逆转录成cDNA |
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锚定引物逆转录成cDNA |
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采用随机引物和逆转录引物进行选择性PCR扩增 |
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采用随机引物和逆转录引物进行选择性PCR扩增 |
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扩增产物进行凝胶电泳分析 |
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差异性条带的回收与第二次扩增 |
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Northern杂交，Southern杂交再次确定差异性条带的真实性 |
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差异性条带的克隆、测序、分析，DNA及氨基酸序列联机检索 |
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以差异性条带为探针克隆出基因组文库中的基因 序列及cDNA文库中的全长cDNA序列 |
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基因功能的鉴定： ①knock out ②dominant negative mutation ③原核系统或真核系统中的表达翻译。抗体的制 备，细胞内的定位，抗体抑活等等。 ④one hybrid判断出该基因的“启动”基因。 ⑤two hybrid判断出该基因的产物的作用途径。 |
这里以CLONTECH公司生产的DeltaTM Differential Display Kit为例，介绍具体的实验步骤。该试剂盒中含有10种任意引物和9种Oligo(dT)引物。
