AMAMFSAc05030 巧克力制品 藻酸盐 溶解法
AM-AM-FS-Ac-05030
巧克力制品中的藻酸盐
1.试剂
氢氧化铁-硫酸试剂——在两个离心瓶中各将10g FeCl3·6H2O溶于约100ml水中，用过量的NH4OH沉淀Fe(OH)3(通过气味来鉴别)。用水洗涤沉淀约5次，离心，倾滗上层清液直至残留的NH3气味很小为止。每次洗之前都捣碎离心过的沉淀。将沉淀在蒸汽浴上干燥或在烘箱中过夜。捣碎，再干燥，用刮勺或研钵研磨成适当的细粉末。在密封容器中存放。
氢氧化铁(潮湿的)可以代替上述沉淀的Fe(OH)3，将这一产物转移到离心瓶中，振荡，离心，倾滗上层清液，洗涤，按上面的方法干燥。在50ml具玻璃塞量杯中加入0.5g干燥粉末，加50ml H2SO4充分振荡，让其沉降至清晰(通常要4—7d)。一些硫酸铁盐明显地粘附于壁上，但7d之后，试剂即可使用。三周之后制备新鲜的。用前按下面的方法检验:
在含有5滴0.1M NaOH的水中，溶解少量的(1-5mg)市售藻酸盐，加4体积乙醇沉淀藻酸盐。离心，倾滗，在蒸汽浴上干燥至无乙醇气味存在。采用空气对流法除去最后的痕量乙醇。加3滴0.1M NaOH，用玻璃棒搅拌使之溶解，加入2ml Fe-H2S04试剂。溶液逐渐转变为红紫色，这通常需要1h，或许时间更长些，主要看存在的藻酸盐量。如果溶液变成棕色，再加2ml试剂，用玻璃棒使之混合，静置。
2.试验过程
称量含10-20mg藻酸盐样品放入250ml离心瓶，加水使体积至40-50ml，来回振荡使之溶解。用饱和Na3PO4溶液调节pH值至8-9，通常用5滴就足够了。加约0.5g胰酶和3滴HCHO，充分振荡1min，静置2-16h。
以1200r/min离心2-3min，倾滗清液到250ml离心瓶中，弃去残留物。加3-4体积乙醇，振荡，静置1h以上，其间振荡数次。如同前法离心并弃去液体。在残留物中加50ml水和1滴10% NaOH，并充分振荡使残留物完全溶解。加3g脱色炭 (NuChar炭)，充分振荡1h，在振荡器上更好。不要离心，直接倾入折叠滤纸，在250ml离心瓶中收集滤液。如果滤液不清，再倒回滤纸上过滤几次。如果过滤较慢，让过滤过夜。由于碳吸附了一些藻酸盐，为了回收它们(约1mg)，用另外50ml水和5滴0.1M NaOH共振荡再提取碳，将这一滤液加入到第一次提取液中。
向滤液中加入4体积的乙醇，振荡，静置1h以上，最好是放置过夜。离心，倾滗，保留残留物。残留物中含有藻酸盐，树胶和明胶。在蒸汽浴上干燥残留物，也可以用空气环流法，直至不再嗅到乙醇气味。冷却，加3滴0.1M NaOH溶解残留物，使用玻璃棒尽可能地使其完全溶解。加2ml Fe-H2SO4试剂，用玻棒混合，如果溶液很快变成红紫色，所加试剂已足够。如出现棕色，则另加2ml试剂。因颜色显示较慢，可让其静置过夜。对于藻酸盐，深紫色是阳性试验。如果试验是阴性。重新测定，使用两倍的样品，增加活性炭至4g，振荡1.5h，以进一步确认。
3.来源
AOAC 官方方法959.06第17版