刺参人工繁殖的第一个步骤,便是取得大量优质、成熟的配子(精、卵),这是人工育苗成败的关键。亲参采卵的途径有以下方法:
一、自然产卵亲参采捕的时间适宜,性腺发育充分成熟,可以采用自然产卵法。
这种方法的优点是简单易行,基本上可以满足育苗的需要。刺参往往在傍晚或夜间产卵、排精,不能人为控制产卵时间和产卵量,有时还会发生产卵量过大、精液过多造成水质败坏而导致受精卵大量解体的现象。因此,应安排夜间值班人员,随时观察,及时收集,或达到采卵量后将亲参取出放到其他池中,或将过多的雄性排精刺参移出排卵池。
二、人工刺激产卵诱导刺参排精产卵的常用方法有温差法、紫外线海水浸泡法、阴干流水刺激法。
1.温差法
操作温差在蓄养海参的培育海水温度下,向上或向下增减5℃~8℃为宜。诱导时,可将亲参直接置入高温水中(直接升温);或将亲参先以低水温处理后,再以高水温处理(先降温后升温);或是将亲参以高低水温反复处理(高低温交互操作)。通常一次升(降)水温的处理时间为1小时到隔夜不等,需视亲参状况而定。若发现有产卵迹象,应移出个体放到正常水温环境中。
2.紫外线海水浸泡法
此方法是用经紫外线灯管照射过的海水,诱导亲参生殖(其机制尚不明了)。通常10升海水,以8瓦特功率紫外线灯管照射,在水流速率10升/分钟状况下,需循环1小时后方视为其已达饱和。循环过程中充分曝气,使水体中溶解氧充足。“紫外线海水”制备完成后,将亲参置入其中,最高以每升紫外线海水中放一头为限。通常雄性个体在诱导后0.5小时即排精,雌性个体则需较长时间(45分钟到数小时不等)。在诱导过程中需仔细观察亲参状况,遇有自割或吸水膨大的个体,需将其立即移出至正常海水环境中。
3.阴干流水刺激法
一般是在傍晚以后进行。先将蓄养池内的海水放干,让亲参阴干45分钟到1小时,再用水冲击10分钟~15分钟,或流水40分钟~50分钟,然后将亲参放入加有新鲜过滤海水的池中。一般情况下2小时左右,亲参开始向表层池壁爬行,移动频繁,经常将头部抬起在海水表层左右摆动,雄性开始排精,0.5小时后雌参开始产卵。在实际生产中阴干、流水和升降温的方法常被结合使用。
4.氯化钾注射法
本方法适用于体型小且成熟度高的个体。其作用机制为通过提高亲参体腔体液中的钾离子浓度,使体壁肌收缩,挤压生殖巢而将配子排出。氯化钾的注射浓度为0.5摩尔/升~1摩尔/升,亲参湿重为0.5公斤时总注射量为5毫升,且应以1毫升~2毫升剂量每隔10分钟注射1次,以避免刺激过度。为了尽可能不使亲参自肛门排出内脏,宜以针柄将其肛门固定于水面之上。若其生殖腺成熟度高,可在短时间内排出配子。反之,若亲参成熟不好则会引起自割。
5.解剖法本方法
适用于个体大且诱导生殖困难的个体(通常为雌性,卵子未达到最后成熟阶段)。使用刀片自亲参触手部后方1/4体长背侧处,切出约3厘米长的开口,双手轻轻推挤亲参体中段部位使其生殖巢流出。
采得的生殖腺立即以干净海水清洗数次,防止亲参的体液影响生殖腺的品质。此时所获得的卵子通常没有受精能力(未达到最后成熟),需加以催熟后才能进行受精。催熟的方法有药物浸泡法及卵巢切碎法,分别叙述如下:
(1)药物浸泡将卵巢用探针挑破,释放出的卵子以DTT、BAL或L-Cysteine等药品,配制成浓度为0.1摩尔/升的海水溶液,浸泡15分钟后,以干净海水重复清洗1小时,再进行授精。采用药物浸泡法时,需严格遵守剂量及浸泡时间以免药品对卵子造成毒害。将所采得卵子放到容器中,加入微量(约和卵量同体积)的干净海水,随即加入精子(一头雌体的卵量,加入未稀释精液1滴或已稀释精液数滴)并且轻轻搅拌(摇晃),而后每隔5分钟以等比例增加的量加入干净海水稀释。
(2)沉淀洗卵法将所采得的卵子浸泡于干净的海水中备用,另将干净的精液加入10倍体积海水中稀释并使之活化。在卵液中加入精子稀释液(一头雌体的卵量,加入数滴精子稀释液)并且轻轻搅拌使之充分受精。而后将精卵混合液静置,待受精卵沉淀,吸出上层含精子海水,加入干净海水清洗受精卵