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材料与方法
一：蒸 汽 灭 菌 器
二：序批式污水处理系统
三：过氧化氢蒸汽消毒器
四：生物指示剂包括嗜热脂肪杆菌( ATCC 7953) 芽孢和枯草杆菌黑色变种( ATCC 9372) 芽孢制备的菌片; 化学指示物包括压力蒸气灭菌专用 121 ℃ 和132 ℃指示卡( 国内产品) 。所用培养基包括两种细菌芽孢专用恢复培养用营养肉汤培养基，为国内市售产品。
试验方法
双扉压力蒸汽灭菌器鉴定
①灭菌效果验证: 依据 RB /T 199 － 2015《实验室设备生物安全性能技术规范》，分别使用化学指示卡( 121 ℃ 和132 ℃ ) 及嗜热脂肪杆菌( ATCC 7953) 芽孢生物指示物对 2 台双扉压力蒸汽灭菌器进行灭菌效果验证。
②B － D 检测: 依据 RB /T 199 － 2015《实验室设备生物安全性能技术规范》，使用 B － D 测试包对 2台双扉压力蒸汽灭菌器进行冷空气排除和蒸汽穿透效果验证。
序批式污水处理系统灭菌效果验证
依据RB /T 199 － 2015《实验室设备生物安全性能技术规范》，使用嗜热脂肪杆菌( ATCC 7953) 芽孢生物指示物对该系统运行一个灭菌周期( 灭菌温度 125 ℃，20 h 以上) 后的效果进行验证。
过氧化氢蒸汽消毒器消毒效果验证
参考2002 年版《消毒技术规范》，采用汽雾过氧化氢消毒机，使用枯草杆菌黑色变种芽孢菌片分别对 ABSL－ 3 核心区、缓冲间及高效过滤单元进行消毒效果验证。
结果
压力蒸汽灭菌器鉴定
分别将化学指示卡、嗜热脂肪杆菌芽孢生物指示物及 B － D 测试包按要求放入待检测的两台压力蒸汽灭菌器内。运行检测程序后，化学指示卡指示色块完全变为黑色，与标准色一致; 嗜热脂肪杆菌芽孢生物指示物经 56 ℃ 培养 48 h 后，培养基颜色仍为紫色阴性结果，阳性对照为黄色; B － D 测试包内测试图由黄色变为均匀黑色。因此，压力蒸汽灭菌器鉴定合格。
污水处理系统效果验证
将嗜热脂肪杆菌芽孢生物指示物放入序批式高温污水处理系统测试口，运行一个消毒周期( 灭菌温度 125 ℃，20 h 以上) 后取出，在 56 ℃ 培养箱培养 48 h 后观察，培养基颜色仍为紫色阴性结果，阳性对照变为黄色。判定污水处理系统灭菌效果验证合格。
过氧化氢蒸汽消毒器消毒效果验证
ABSL － 3 核心区和缓冲间环境消毒效果验证 将枯草杆菌黑色变种芽孢菌片布置 16 个采样点( 具体布点位置见图 1) 。汽化过氧化氢消毒设备运行一个消毒周期( 使用有效含量 35% 过氧化氢消毒 剂 喷 雾 时 间 79 min，喷 液 量 12 g /min，维 持50 min，喷液量 4 g /min，自行降解 145 min。消毒剂总注入量 1 148 g) ，待仪器检测房间内过氧化氢浓度降至 0． 9 ppm 后进入房间，采用无菌操作方式取菌片放入培养基( 含经鉴定合格的中和剂) 中，振打200 次，置于 37 ℃ 恒温培养箱，同时设阳性对照组和阴性对照组，培养 7 d 观察结果。结果显示，在 95m3 的 ABSL － 3 核心区和缓冲间，温 度 20． 4 ～24． 7 ℃，湿度 21% ～ 42% ，使用汽化过氧化氢消毒设备运行一个消毒周期，对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭对数值 ＞ 6． 0; 定性培养，结果显示全部无菌生长( 表 1) 。
高效过滤单元消毒效果验证 根据高效过滤单元位置，将枯草杆菌黑色变种芽孢菌片布置 8个采样点( 具体布点位置见图 2) 。汽化过氧化氢消毒设备运行一个消毒周期( 使用有效含量 35% 过氧化氢消毒剂，喷雾时间 49 min，喷液量 2． 3 g /min，维持 90 min，降解 30 min。消毒剂总注入量 112． 5 g) ，待仪器检测房间内过氧化氢浓度降至 10 ppm 后，采用无菌操作方式取样放入培养基( 含经鉴定合格的中和剂) 中，振打 200 次，置于 37 ℃ 恒温培养箱，同时设阳性对照组和阴性对照组，培养 7 d 观察结果。结果显示，在环境温度 20． 4 ～ 24． 7 ℃，湿度 21% ～42% 条件下，使用汽化过氧化氢消毒设备运行一个消毒周期，对高效过滤单元不同位点布置的枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭对数值均 ＞ 6． 0，同时经样片中和肉汤管定性培养，结果显示全部无菌生长
讨论
高等级生物安全实验室通常是指 P3、P4 生物安全实验室，一般用于操作危险等级较高的病原微生物如主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物或毒素; 或者对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明、目前尚无有效疫苗或治疗方法的致病微生物或其毒素。
高等级生物安全实验室在标本处理、仪器设备使用、实验操作、实验动物处理、废物处理等多个环节均有可能产生生物污染。生物安全实验室的核心是安全，包括实验结束。对于批量废物、废液的处理，以及实验室环境空气、关键大型仪器设备如排风高效过滤器、生物安全柜、隔离器、动物笼具等，采取安全、有效的消毒灭菌措施，建立客观、科学的消毒灭菌效果评价方法与指标，对于保障实验室生物安全、保护实验人员健康是十分必要的。
在本研究中，根据双扉压力蒸汽灭菌器、序批式污水处理系统、过氧化氢蒸汽消毒器的相关消毒机理与作用方式，分别依据或参考我国 RB /T199 －2015《实验室设备生物安全性能技术规范》与 2002年版《消毒技术规范》相关方法开展消毒灭菌效果性能评价，根据生物、化学指示物的颜色或菌量变化进行结果判定，验证各种关键设备的消毒灭菌效果，为相关实验室安全性判定提供依据。
国外发达国家如法国、美国、德国等在高等级生物安全实验室方面起步较早，发展较快。针对高等级生物安全实验室关键设备如化学淋浴消毒装置通常采用各国生产企业的产品技术指标。废水处理系统、动物残体处理系统也没有制定相关技术标准，通常借鉴蒸汽灭菌器及动物屠宰处理设备的相关标准，对于高等级生物安全实验室并不完全适合。对于环境消毒设备，国外有针对医疗环境消毒灭菌效果评价的标准，但对于高等级生物安全实验室环境消毒并没有针对性标准。近年来开始应用并推广的汽化过氧化氢等设备，在美国也多为环保署、医疗保健流行病学会、感染控制与流行病专业学会、医疗保健环境学会等相关机构在关注其效果评价。在欧洲，法国已形成针对汽化过氧化氢系统的测试标准NF72 － 281，但其他国家还未采用，该标准正在进行评估以成为欧洲标准
